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EMSA实验的原理是基于DNA结合蛋白与DNA的特异性结合,依据实验需要,设计标记探针、非标记探针、蛋白特异性抗体等参照物,通过电泳迁移率的变化来进行定性和定量分析,钟鼎生物提供的EMSA实验(凝胶/电泳迁移率实验)基于生物素标记探针与对应的DNA结合蛋白的特异性结合,设计合理、科学的实验方案,为客户提供验证性的EMSA,竞争性的EMSA以及超迁移EMSA(Super-shift EMSA)实验服务。



服务特色

EMSA服务优势


EMSA服务详情 

EMSA服务
服务编号 服务说明 服务报价
5'生物素(biotin)探针合成 合成生物5'生物素(biotin)探针

技术支持客服

400-066-8086

验证性EMSA 验证生物素标记探针与结合蛋白互作的EMSA
竞争性EMSA 生物素标记探针、非标记探针与结合蛋白互作的EMSA
超迁移EMSA(Super-Shift-EMSA) 特异性抗体进一步鉴定探针与蛋白结合物的EMSA

说明:选择Super-Shift-EMSA的客户需提供特异性的抗体,为满足部分客户的特殊实验要求,本公司同时可提供基于Dig(地高辛)探针法的EMSA实验方案。

客户提供实验材料

1、细胞核蛋白或纯化的转录因子,部分实验亦可使用重组表达的蛋白,依据实验设计每张膜至少提供50ul,浓度大于0.5mg/ml
2、探针序列,如无探针序列,请提供DNA结合蛋白相关信息或相关文献,便于钟鼎生物技术人员设计探针
3、结合蛋白特异性抗体50ul以上,浓度大于0.5mg/ml

EMSA实验流程

1、泳道设定及浓度梯度实验设计
2、3'生物素探针设计及合成 
3、EMSA电泳凝胶配置
4、EMSA反应
5、EMSA反应物电泳检测
6、显色反应
7、实验分析及报告撰写

EMSA服务发货文件

1、实验合成生物素标记探针
2、非标记探针(竞争法EMSA)
3、剩余目的蛋白和抗体
4、标准实验流程报告
5、原始实验图片及数据
6、如果是实验有额外的要求,请提前致电或邮件说明

EMSA实验流程



案例展示

EMSA案例展示



技术交流

部分客户发表文章:

1、WRKY46 promotes ammonium tolerance in Arabidopsis by repressing NUDX9 and IAAconjugating genes and by inhibiting NH4+efflux in the root elongation zone
DOI: 10.1038/s41438-020-0327-z(IF=8.55)

2、CsMYB60 directly and indirectly activates structural genes to promote the biosynthesis of flavonols and proanthocyanidins in cucumber
Hortic Res. doi: 10.1038/s41438-020-0327-z.(IF=5.4)

3、A WRKY transcription factor PbrWRKY53 from Pyrus betulaefolia is involved in drought tolerance and AsA accumulation
Plant Biotechnology Journal, 2019, 17:1770–1787.


文章解读

2021年6月15日,New Phytologist在线发表了中国科学院南京土壤研究所/土壤与农业可持续发展国家重点实验室施卫明团队完成的题为“WRKY46 promotes ammonium tolerance inArabidopsis by repressing NUDX9 and IAA-conjugating genes and by inhibiting NH4+ efflux in the root elongation zone”的研究论文。该研究发现拟南芥WRKY46转录因子通过整合调控蛋白N-糖基化和游离型IAA含量来抑制根伸长区NH4+的外流,以增强对铵毒的耐受性。其中的EMSA项目由钟鼎生物协助完成

本文主要结果:

1.WRKY46参与拟南芥根的高NH4+响应

本研究利用NH4+处理和非处理的拟南芥根系为材料进行RNA-seq检测和分析,结果发现多个WRKY转录因子家族的转录水平受到明显诱导,其中,WRKY46对NH4+响应最灵敏。pWRKY46::GUS染色结果显示,高NH4+诱导根中,尤其是根尖部位WRKY46的上调。敲除及过表达株系表型分析表明,WRKY46主要在根EZ部位发挥功能,并正调控高NH4+条件下的PR生长。

2.WRKY46通过蛋白质N-糖基化来稳定NUDX9以抑制NH4+外流

已有研究表明伸长区NH4+通量的增加是与NH4+胁迫下主根生长抑制相关的关键特征之一。为检测WRKY46对高NH4+条件下主根生长的促进是否与NH4+通量调节有关,对不同遗传材料(野生型、WRKY46突变体及过表达材料)根系分生区和伸长区的NH4+净通量进行检测,结果发现WRKY46负调控根伸长区NH4+的外流

已知GDP-甘露糖焦磷酸化酶(NUDX9)通过调节蛋白N-糖基化而参与调控高NH4+下的主根生长。本研究通过ChIP-qPCR、Y1H、EMSA及LUC活性检测发现,WRKY46直接与NUDX9启动子结合并负调控该基因的转录。随后对不同遗传材料根NH4+通量及糖基化水平的检测表明NUDX9作用于WRKY46下游并参与WRKY46依赖的高NH4+响应,但该过程还包含其他下游靶基因的参与

3.游离IAA参与伸长区部位WRKY46介导的NH4+外流抑制

研究显示,高NH4+下的主根生长抑制与生长素吲哚-3-乙酸(IAA)有关联,且WRKY46参与调控渗透/盐胁迫下根中IAA的含量。通过pDR5::GUS检测发现,WRKY46表达差异所导致的NH4+敏感性差异与游离IAA含量有关。进一步实验结果显示,WRKY46直接与IAA结合基因(GH3.1、GH3.6、UGT75D1、UGT84B2)的启动子结合并抑制它们的转录,从而正调控游离IAA含量以抑制根伸长区NH4+外流。此外,进一步通过IAA外源处理检测发现,蛋白N-糖基化抑制的NH4+外流部分依赖于IAA含量

综合所述,在高NH4+条件下,NH4+可诱导拟南芥中WRKY46转录因子的表达。随后,WRKY46直接与GH3.1、GH3.6、UGT75D1和UGT84B2基因启动子结合并抑制它们的表达,从而维持游离态IAA含量和初生根的生长。与此同时,WRKY46通过抑制NUDX9转录以稳定蛋白质N-糖基化水平,由此IAA生物合成酶在N-糖基化后保持稳定,IAA在高NH4+条件下的生物合成也随之增加。升高的游离IAA可诱导IAA结合基因的转录,而这与WRKY46的转录抑制间接相关(图1)。总之,WRKY46通过抑制IAA结合和蛋白质N-糖基化来维持IAA稳态,是培育高NH4+耐受作物品种的宝贵遗传资源

文章解读

图1. WRKY46响应高铵胁迫模式图

中科院南京土壤所施卫明团队的李光杰副研究员为本文的通讯作者,助理研究员狄东伟为本文第一作者,已出站博士后孙丽,副研究员王萌,已毕业博士生吴晶晶,中科院遗传发育所的褚金芳老师和房爽老师以及墨尔本大学的Herbert J. Kronzucker教授也参与该项研究。该工作得到包括国家自然科学重点项目、青年基金项目及江苏省杰青等经费的支持。





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