酵母单杂交技术是由Li等从酵母双杂交技术发展而来的（1993年），是根据DNA结合蛋白(即转录因子)与DNA顺式作用元件结合调控报告基因表达的原理，克隆与靶元件特异结合的转录因子基因的有效方法。
文库建立和文库筛选
互作验证
| 服务内容 | 客户需提供 | 交付结果 | 价格 |
|---|---|---|---|
| 文库筛选 | 1、诱饵基因序列或诱饵质粒 （pHis2-Bait或pAbAi-Bait）； 2、文库质粒（不少于50ug AD文库质粒/每次筛库） （客户最好能提供文库质检相关信息：如物种、库容、文库滴度、文库cDNA片段大概的大小等） |
1、质粒在受体菌的阳性菌 2、提供详细的、完整的实验报告，清晰的实验图片 3、筛选结果的测序结果和质粒 |
在线询价 |
| 蛋白-蛋白点对点互作验证 | 1、pHis2-Bait或pAbAi-Bait和AD-prey质粒 2、或者Bait和Prey序列，质粒由我们构建 |
1、提供详细的、完整的实验报告，清晰的实验图片 2、在受体菌的阳性菌 |
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| 自激活和毒性验证 | 1、pHis2-Bait或pAbAi-Bait质粒 2、或者Bait序列，质粒由我们构建 |
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| 酵母质粒提取和测序 | 酵母菌液或者具有菌斑的平板 | 1、提供详细的、完整的实验报告 2、筛选结果的测序结果和质粒 |
1 载体构建
根据客户提供基因序列构建好的pBait-AbAi载体
2 pBait-AbAi质粒线性化
图1. pBait-AbAi BstBI酶切
Lane M：DNA Marker 1kb
Lane 1：酶切前p53-AbAi
Lane 2：酶切后p53-AbAi
Lane 3：酶切前pAbAi
Lane 4：酶切后pAbAi
Lane 5：酶切前pBait-AbAi
Lane 6：酶切后pBait-AbAi
由图1可知，p53-AbAi质粒、pAbAi质粒和pBait-AbAi质粒均已正确酶切开，可用于下步实验。
3 线性化pBait-AbAi质粒整合Y1HGold检测
图2.线性化pBait-AbAi整合Y1HGold后PCR鉴定
Lane M：DNA Marker 2000
Lane 1：p53-AbAi质粒
Lane 2,3：Y1HGold[p53-AbAi]
Lane 4：pAbAi质粒
Lane 5,6：Y1HGold[pAbAi]
Lane 7：pBait-AbAi质粒
Lane 8,9：Y1HGold[pBait-AbAi]
由图2可知，阳性菌株Y1HGold[p53-AbAi]菌落PCR鉴定条带与质粒p53-AbAi PCR鉴定条带大小一致，表明p53-AbAi已成功转入Y1HGold基因组中；阴性菌株Y1HGold[pAbAi]菌落PCR鉴定条带与质粒pAbAi PCR鉴定条带大小一致，表明pAbAi已成功转入Y1HGold基因组中；诱饵菌株Y1HGold[pBait-AbAi]菌落PCR鉴定条带与质粒pBait-AbAi鉴定条带大小一致，表明pBait-AbAi已成功转入Y1HGold基因组中。线性化pBait-AbAi整合Y1HGold后PCR产物测序结果见附件一。
4 自激活检测
注：AbA浓度分别为0，100，150，200，300，500，700，900 ng/ml
图3可以看出pBait-AbAi成功转入Y1HGold菌株中，且500 ng/ml AbA可以抑制背景菌生长，可以选择500 ng/ml AbA进行单杂筛库实验。
5 筛选结果
将Y1HGold[pBait-AbAi]与酵母单杂cDNA文库进行筛选，在SD/-Leu/AbA（500 ng/ml）筛选平板上共有个15阳性克隆生长，点板图片见下图。
6 一对一互作验证结果
Y1HGold[pBait-AbAi]进行一对一互作验证后，点板图片见下图
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