微量热泳动（MicroScale Thermophoresis，MST）是由基于Nano Temper 公司Monolith NT.115仪器检测分子互作，待检测的互作生物分子可以是蛋白-抗体，蛋白-蛋白，蛋白-DNA/RNA蛋白-小分子化合物等。
将其中一个互作分子（大多是蛋白）标记荧光染料或者融合GFP标签，将标记蛋白和配体分子按照特定的浓度梯度置于毛细管中，红外激光加热产生一个微观的温度梯度场发生热泳动，其水化层、分子大小、电荷等分子性质会随着热泳动发生改变，进而引起反应体系中荧光分布的变化。MST除了能精确检测生物分子间相互作用，通过计算解离常数（Kds），还能得到有关生物分子互作的其他参数，实现精确的定性分析。
NanoTemper Monolith NT.115 检测设备。下方为容纳 16 根毛细管的托盘。
毛细管吸取约 4 μL 的反应体系。仪器通过物镜对毛细管内的荧光进行激发和检测。
初始阶段，溶液中的分子均匀分布， 并检测这一阶段的荧光值。红外线开启后立刻出现脉冲升温，由于温度的快速改变，荧光团的分布也发生改变。随后，荧光分子远离红外线加热的区域。红外线开启 30s时出现典型的荧光变化。关闭红外线后，发生逆向的 T-jump，反应体系恢复均匀分布的状态。
荧光标记的分子（黑色曲线表示未结合）与未标记的配体结合后改变其自身的热泳 动（红色曲线表示结合），产生不同的检测曲线。用标准化的荧光值 ΔFnorm（ΔFnorm=Fhot/Fcold.）表示分子热泳动的变化（F 值指 粉色和蓝色光标所标注区间内的平均荧光值）。不同毛细管中逐渐增加未标记荧光的配体浓度，会产生不同热泳动检测信号， 利用 ΔFnorm 绘制出结合曲线
（1）模拟体内蛋白-蛋白结合对比实验
实验目的：验证X 与 野生型YWT ，X 与 突变型 YMu 两组蛋白的结合能力差异情况。
实验方法：将X蛋白作为配体蛋白， Y蛋白作为受体蛋白，用原核重组表达（体外结合）和过表达转染细胞（半体内）两种方式，使用MST技术，检测解离常数。
实验结论：突变的产生导致X 与Y蛋白的亲和力明显下降，说明结合能力减弱，体内体外数据一致。
参考文章： A synergetic effect of BARD1 mutations on tumorigenesis Nature Communications (2021)
（2）转基因植物过表达融合GFP标签与蛋白的相互作用
实验目的：验证蛋白X与Y蛋白两个亚基Y1 Y2的结合能力。
实验方法：分别用Co-IP与MST的方法，利用过表达的植物裂解液与X重组蛋白结合，检测X蛋白与两个亚基的亲和力。
实验结论：植物裂解液Y1和Y2都能与X蛋白结合，其中Y1结合能力更强。
参考文章： Identification of Core Subunits of Photosystem II as Action Sites of HSP21 That Is Activated by the GUN5-Mediated Retrograde Pathway in Arabidopsis Plant Journal 2017
