蛋白质谱

　　MALDI-TOF：基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱，采用这个方法测得肽质量指纹谱（PMF），在数据库中鉴定蛋白质，是当今最主要的鉴定方法之一。

原理

  用激光照射样品与基质形成的共结晶薄膜，基质从激光中吸收能量传递给生物分子，而电离过程中将质子转移到生物分子或从生物分子得到质子，而使生物分子电离的过程。因此它是一种软电离技术，适用于混合物及生物大分子的测定。TOF的原理  是离子在电场作用下加速飞过飞行管道，根据到达检测器的飞行时间不同而被检测即测定离子的质荷比（M/Z）与离子的飞行时间成正比 ，检测离子。

LC-MS/MS：液相色谱跟质谱联用

差别

1、 MALDI-TOF没有液相分离的过程，只能检测少量蛋白质，适合样品中蛋白数量较少，或者纯度较高的样品。价格便宜。

2 、LC-MS/MS：适合较复杂样品，可以同时分辨几百上千种。价格较高。

MALDI-TOF ：应用

1、PMF：双向电泳挖点得到的蛋白鉴定（双向电泳胶点），纯化后的重组蛋白鉴定。

样品要求：胶条或者胶点中的蛋白 考马斯亮蓝染色或者银染后肉眼可见；
               蛋白溶液样品需要确认缓冲液体系适不适合做后续质谱检测
               胶条或者胶点可以装在进口的灭菌EP管中，常温寄送。溶液最好干冰寄送。

2、蛋白分子量鉴定（分子量在20-600kd之间）。

样品要求：样品的需要量约为10-50ug；
               样品纯度＞90%；
               样品准备过程中尽量避免表面活性剂，例如SDS、Triton-X等的使用；盐浓度。

LC-MS/MS ：应用

1、质谱：CoIP实验得到的样品 或者sds电泳切胶得到的样品

Co-IP样品要求：

  a.如果您洗脱的样品需要跑胶，请按照1D SDS PAGE样品准备要求准备样品即可；
  b. 如果您直接提交洗脱样品，我们推荐使用HPH EB (0.5 M NH4OH, 0.5 mM EDTA)缓冲体系进行蛋白洗脱，保证洗脱缓冲体系与后续的质谱实验兼容；

2、蛋白分子量鉴定：

  样品要求： 溶液或者冻干后的粉末，纯度大于50%