钟鼎生物自建立ZoonSpeed™ 的Southern Blot杂交服务平台以来，帮助客户完成过拟南芥、大豆、烟草、苎麻、 玉米、棉花、水稻、油菜等多物种检测，成功发表数十篇高水平论文，钟鼎生物的探针使用DIG（地高辛）标记，具有低噪、高敏、无放射性污染等优点，实验过程中保留原始数据和实验材料，数据真实可信，具有可重复性。我们使用传统的胶片曝光与前沿的自动化学发光成像检测系统相结合，确保捕获更好信噪比的成像时间点，可以交付给客户高品质的实验结果，客户可直接使用钟鼎生物提供的southern杂交实验数据向高水平的杂志投稿。

同时，钟鼎生物能够熟练运用MLP33.15应用到细胞株指纹图谱构建当中，致力于为不同需求的科研用户提供多样多层次的服务。

Southern Blot服务报价

Southern Blot服务列表
服务编号	服务说明	服务内容	服务周期	服务报价
BM601	地高辛（DIG)探针标记	PCR法DIG探针标记/基因，灵敏度检测	1周	在线询价
BM602	ZoonSpeed™  Southern杂交检测	8个样品+1个阳性对照+1个Marker（一张膜）	1-2周
BM603	细胞株指纹图谱构建	利用MLP33.15对客户提供的细胞株进行Southern blot印记杂交	3-4周
BM604	端粒检测	基因组DNA提取，Southern杂交检测	1-2周
BM605	重组CHO细胞遗传稳定性检测	基因组DNA提取，地高辛探针合成,Southern杂交检测	2-3周

说明：客户自备样品的，请提供高质量的DNA样品。如果需要钟鼎生物帮助提取DNA样品，请提供新鲜的细胞、组织或菌液，我们会酌量加收部分服务费用。

客户提供材料

1、待杂交目标基因序列和含有待杂交基因的阳性质粒，我们会依据Southern杂交实验要求重新选择全长或部分区域作为探针序列，使用PCR法标记地高辛探针。

2、待杂交的高质量DNA样品质量至关重要，决定实验的成败，请确保DNA抽提质量，尽量采用进口试剂盒提取或委托钟鼎生物提取。
  A、基因组DNA检测：OD260/OD280=1.8-2.0，基因组要求DNA总量不小于10ug，浓度大于50ng/ul；不同作物所需提供DNA量见下表（请以qubit为准，nanodrop定量仅做参考）：

作物	基因组大小（Mb）	DNA杂交需求量（μg）	植物叶片需求量（g）
水稻	389	20	5
棉花	780	40	10
油菜	1130	50	10
玉米	2300	100	10
小麦	4500	100	10
大豆	1100	50	10

  B、请提供基因组DNA检测图片，要求无降解，无蛋白污染，电泳检测标准请参考southern blot实验案例；
  C、检测样品低温运输至公司，或交给当地的业务员或代理商处理

3、客户如果无法提供高品质的基因组DNA样品，钟鼎生物可以帮助制备可用于Southern Blot检测的DNA样品，客户提供样品要求如下：
  A、菌液：不低于500ul，冰袋或者干冰运输
  B、组织：总量不小于100mg,干冰运输
  C、细胞：提供新鲜的细胞即可，尽量不要使用盐溶液冲洗

4、请注明基因组DNA酶切方案，如果项目中需要用到非常规的限制性内切酶，需额外加收酶切费用或由客户提供相应的限制性内切酶。

 

Southern Blot实验流程

 

RFC1基因AAGGG纯合扩增重复与多系统萎缩有关

近日，中南大学湘雅医院神经内科江泓教授团队，在探索多系统萎缩（Multiple System Atrophy, MSA）致病基因的研究中取得了重要进展，以“Biallelic intronic AAGGG expansion of RFC1 is related to multiple system atrophy”为题，在国际临床神经病学顶尖期刊《Annals of Neurology》(IF=9.037)以原创论著形式发表。

多系统萎缩（MSA）是一种罕见的、成人起病的神经系统退行性疾病，发病率约为3.4-4.9/10万人，其发病机制至今尚不明确。该病临床表现复杂，以进行性自主神经功能障碍，伴帕金森样症状、小脑性共济失调症状及锥体束征为主要临床特征，其平均生存年限为6-9年，目前尚无有效的治疗手段，致死率和致残率极高，给患者、家庭和社会带来极大的负担。

该研究首次在中国大陆MSA和散发性成年起病型共济失调（SAOA）患者中，发现了 RFC1基因AAGGG五核苷酸大片段纯合扩增重复序列的存在，提出该重复扩增可能是MSA的致病基因之一，同时报道了RFC1基因不同扩增形式在中国MSA、SAOA与正常人群中的携带率，并在国际上首次提出了RFC1谱系疾病的概念，MSA可能为该谱系疾病中的重要表型，促进了该谱系疾病的基因-表型关联研究。

在钟鼎生物的帮助下，客户获得清晰、低噪、客观真实的实验结果，看到客户文章的发表，我们与有荣焉！

1、The minicircular and extremely heteroplasmic mitogenome of the holoparasitic plant Rhopalocnemis phalloides.Published:December 13, 2021(IF= 9.49)
2、CsPrx25, a class III peroxidase in Citrus sinensis, confers resistance to citrus bacterial canker through the maintenance of ROS homeostasis and cell wall lignification.horticulture research.192 (2020)(IF= 7.6)
3、A WD40-Repeat Protein From the Recretohalophyte Limonium bicolor Enhances Trichome Formation and Salt Tolerance in Arabidopsis. 2019 Nov 12.
4、Genetically modified pigs are protected from classical swine fever virus.PLOS Pathogens, 2018; 14 (12): e1007193 DOI: 10.1371/journal.ppat.1007193
5、Enhanced expression of SaHMA3 plays critical roles in Cd hyperaccumulation and hypertolerance in Cd hyperaccumulatorSedum alfredii Hance.Planta volume 243, pages577–589(2016)
6、Ecdysone receptor isoform-B mediates soluble trehalase expression to regulate growth and development in the mirid bug, Apolygus lucorum (Meyer-Dür) Insect Mol Biol. 2015 Sep 3.
7、Effects of a miR-31, Runx2, and Satb2 regulatory loop on the osteogenic differentiation of bone mesenchymal stem cells. Stem Cells Dev. 2013 Aug 15;22(16):2278-86
8、Overexpression of a maize WRKY58 gene enhances drought and salt tolerance in transgenic rice. Plant Cell Tiss Organ Cult，2014, 119:565-577.

文章发表后，请记得与我们一起分享喜悦，我们会送上贴心的祝福。文章正文中明确提出钟鼎享受现金奖励！

Southern Blot 实验案例：

1、上述实验图片为钟鼎生物精选的比较好的实验结果，为原始曝光胶片扫描，部分结果已见稿。
2、由于样品不同，即使是同一物种的实验材料，我们不承诺所有客户的订单都可以达到上述图片效果。
3、拒绝PS，钟鼎生物可提供曝光的原始胶片，确保实验结果真实可靠，可寻求有实力的第三方实验室验证。

为了更好的保证southern blot实验结果的准确性与美观性:

1、除去Marker和阳性对照，我们建议样品数量不要超过8个，样品太多会导致边缘变形。
2、曝光时间太短，弱带无法显示，曝光时间太长，背景会很高，因此我们会调整曝光时间，分别提供1小时、2小时、过夜等不同时间的曝光片，确认实验的结果的准确性。
3、southern杂交的灵敏度是有限的，丰度太低的片段无法被检测出来。

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