实时荧光定量PCR技术不仅实现了PCR从定性到定量的飞跃，而且与常规PCR相比，它具有特异性更强、有效解决PCR污染问题、自动化程度高等特点，已成为国际公认的核酸分子定量的标准方法，目前在基因表达研究和临床疾病检测等领域已得到广泛应用，南京钟鼎生物技术公司使用SYBRgreen法或者 Taqman 法对 DNA/RNA 进行 real time PCR 的定量测定或型的鉴定。
SYBR Green荧光染料法：适用于任何DNA，无需设计探针，采取双标准曲线法，实验周期短，结果重复性好，灵敏度高。
TaqMan荧光探针法：经验丰富的实验技术人员设计探针，对目标基因有高特异性，实验重复性好，相对于SYBR Green法，灵敏度更高。
服务特色
荧光定量PCR服务报价
| 荧光定量PCR技术服务 | |||
|---|---|---|---|
| 服务项目 | 样品数量 | 服务报价（促销价） | 服务说明 |
RNA提取，反转录 RNA专区操作，进口试剂，规范操作，确保反应模板品质 |
10个样品以下 | 询价 | 样品量>100mg |
| 10-20个样品 | 询价 | 样品量>100mg | |
| 20-30个样品 | 询价 | 样品量>100mg | |
| 30个样品以上 | 询价 | 样品量>100mg | |
基因检测 Light Cycler定量PCR仪器，圆形反应热室，无边缘效应，灵敏度更高，三孔重复 |
1个基因/样品 | 询价 | 1-2周 |
| 2个基因/样品 | 询价 | 1-2周 | |
| 3个基因/样品 | 询价 | 1-2周 | |
| 超过3个基因/样品 | 询价 | 1-2周 | |
| 1、需要进行绝对定量的实验，需提供或委托钟鼎生物构建标准品质粒，以标准质粒构建标准曲线（选5个浓度梯度，3次重复）。 2、使用SYBR-Green染料法进行实验时，引物费用60元/对，每个样品会依据样品来源配套特异性内参，三个复孔重复。 3、使用荧光探针法时，标记探针费用1200元/条，内参引物探针免费。 样品数量较大时，请联系技术支持人员或销售人员，享受更大的折扣优惠 |
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绝对定量是用已知浓度的标准品绘制标准曲线来推算未知样品的量。一般我们将待测的基因序列装入已知大小的质粒中作为标准品，将标准品稀释至梯度浓度，作为底物模板进行荧光定量PCR反应。以标准品拷贝数的对数值为横坐标，以测得的CT值为纵坐标，绘制标准曲线。当检测未知样品时，使用与标准质粒相同的反应条件和相同的引物序列，扩增得出CT值，即可在标准曲线中计算出样品中目的基因拷贝数。
| 荧光定量PCR标准曲线绘制 | |||
|---|---|---|---|
| 服务项目 | 实验说明 | 实验周期 | 实验报价 |
| 标准质粒构建 | 基因合成或PCR克隆法构建 | 1周 | 询价 |
| 标准曲线绘制 | 选择五个浓度梯度绘制标曲 | 1-2工作日 | 询价 |
荧光定量PCR服务流程
1、根据基因序列设计特异性的引物或荧光探针
2、提取样品 DNA/ RNA、电泳、反转录
3、RealTime PCR(荧光定量PCR)，进行扩增曲线、溶解曲线、表达量差异分析等实验
4、实验完成后，提供完整的实验报告（含软件分析结果）及引物等实验材料
荧光定量PCR样品要求
为了更好的为您服务，请提供尽量多的、新鲜的、保存完好的实验组织材料或模板材料，将待检测的目的基因序列或Genebank ID发送至order@zoonbio.com，尽可能提供DNA/RNA来源、丰度等。
| 样品类型 | 细胞 | 组织 | 全血 | 血浆 | RNA | DNA |
|---|---|---|---|---|---|---|
| 样品最少量 | 106 | 100mg | 500ul | 500ul | 5ug | 5ug |
| 推荐保护剂 | Trizol | Trizol | 肝素 | 柠檬酸 | Rnase-Free水 | 无 |
| 运输条件 | 液氮/干冰 | 干冰 | 干冰 | 干冰 | 干冰 | 冰袋 |
荧光定量PCR实验实例：
1、RNA提取实验，钟鼎生物特色提取试剂盒，专区操作，提取的RNA质量更胜一筹。RNA的质量在荧光定量PCR检测实验中非常重要，虽然荧光定量PCR的产物较小，即使在RNA不完整或有降解的状态下，其反转录的产物的扩增曲线依然可用，但为了让数据更加接近真实，我们仍然希望提供新鲜的材料，使用严谨的RNA提取方法获得高品质的RNA。
2、荧光定量PCR反应，钟鼎生物采用的罗氏经典的lightCycler荧光定量PCR仪器，无边缘效应，能更大程度上反应样品中的相对含量，下图为使用仪器自带软件导出的扩增曲线和溶解曲线图，通过图形即可初步判断扩增效率及扩增产物的特异性，我们会为每一个样品拟合扩增曲线及溶解曲线，提供原始的分析数据。
3、荧光定量PCR实验数据分析，每样品分三复孔平行检测，交付报告中直接分析原始数据，计算相对表达量，并以客户指定的样品为标准进行相对定量数据分析。由于样品的特异性，RNA的完整性，引物扩增的效率等因素，荧光定量数据并非100%精确的反映基因的绝对含量，其相对数据只能为基因表达量的判断提供参考。此外，钟鼎生物严格按照荧光定量PCR实验操作流程进行实验，其数据为实验数据的真实反映，我们不承诺分析得到的荧光定量相对定量数据与客户的理论预期100%一致。
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