钟鼎生物以CRO为核心业务，在抗体发现领域深耕多年，具有成熟完善的技术。2012年公司组建羊驼单域抗体研究中心，2014年推出纳米抗体开发服务。随着2018年第一个纳米抗体药物Cablivi被EMA批准上市，国内外各药物研究机构对纳米抗体开发的需求日益增多。钟鼎生物可以提供抗原制备、羊驼免疫、PBMC分离、cDNA制备、抗体库构建筛选、纳米抗体表达纯化、抗体人源化等一站式服务。
专家级别的技术平台
完备的上下游服务
强劲有力的硬件平台
外包服务经验丰富
免疫原检测，免疫前采血。
皮下多点免疫5次
血清效价检测。
采集50ml外周血，用于纳米抗体库构建。羊驼要求
雌性健康羊驼，15-20月龄，体重50kg左右。
抗原要求
A.抗原纯度
高纯度的抗原在产生免疫应答与筛选过程至关重要，因此建议客户抗原纯度在90%以上。我们在收到客户抗原后，会通过SDS-PAGE检测抗原纯度。
B.抗原量
细胞抗原免疫剂量为1.5x10e7 细胞/次/只，5次免疫共需细胞7.5x10e7细胞/只。
蛋白抗原首次剂量为1 mg/只,加免剂量为0.5 mg/次/只，免疫共需蛋白3 mg/只，效价检测用抗原0.1 mg ，每只动物所需蛋白抗原量为3.1 mg 。
不同抗原的需求量不同，请提前与技术人员沟通。同时客户不得隐瞒抗原是否具有致病、致死危险，如有隐瞒且造成实验动物死亡客户需要额外支付动物和项目成本费。
C．抗原浓度
抗原浓度大于0.5 mg/mL,且不含叠氮钠。
备注
不是所有的抗原都能使动物产生免疫应答，如果经过3~4次免疫后检测血清ELISA效价（OD450≈1.0）小于5000，建议终止项目，不再进行抗体库的构建与筛选。
| 步骤 | 周期 | 交付材料 | 询价 |
| 1.动物免疫 | 在线询价 | ||
| A.5次动物免疫 B.效价检测 C.PBMC分离 D.RNA提取 E.cDNA制备 |
92天 | 5次免疫效价检测数据 5次免疫之后的cDNA |
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2.构建噬菌体抗体库  |
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| A.利用免疫羊驼的cDNA，扩增出VHH基因片段，构建M13单链丝状噬菌体展示纳米抗体免疫文库。 B.抗体库质量： （1）VHH抗体片段有效插入率﹥99% （2）抗体库容量达到109次方 C.从文库中随机挑取96个克隆，对其中30个克隆测序，分析VHH抗体片段的多样性和正确率，保证正确率≥80%，另外提供30个克隆用于测序验证。 |
4-6周 | 提供质检报告与抗体库 ①完整的项目报告和原始数据，报告需包含实验流程、分析评估实验的主要操作步骤、以及详细的实验结果； ②共30个文库随机克隆的甘油菌和测序引物； ③噬菌体展示纳米抗体免疫文库的Kit（包含文库甘油菌1ml × 10支和文库噬菌粒质粒10 μg）； |
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| 3.抗体库筛选 |
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| A.筛选方案确定：根据项目实际情况，选择不同的筛选方案，如竞争筛选，固相筛选，液相筛选，细胞筛选，负筛选等筛选方法。 B.淘选： 对抗原蛋白进行SDS-PAGE分析验证，并进行生物素标记；针对生物素化靶点蛋白，利用链霉亲和素预包被的ELISA Plates，淘筛免疫文库；抗原施压法进行2-3轮淘筛，确定充分富集且靶点筛选组的滴度要远高于对照筛选组。 C.结合筛选：选择从Output克隆中，分别挑取940个单克隆进行阳性克隆鉴定。经培养和Phage Rescue后，进行Monoclonal Phage ELISA检测。 D.测序分析:鉴定出抗原结合强阳性的VHH抗体克隆，测序分析，比对序列制作进化树，选择序列独特的克隆。 E.表达验证：少量表达阳性VHH克隆，利用Soluble ELISA检测对靶点抗原的特异性结合能力。 |
6-8周 | 10个以上的特异性克隆 | |
| 4.纳米抗体表达纯化 | |||
| A.将纳米抗体基因克隆至真核或原核表达载体。 | 2周 | 高纯度纳米抗体100-500μg | |
| 5.亲和力测定 | |||
| 采用Biacore 测定抗体的亲和力 采用Nicoya LSPR 测定抗体的亲和力 采用Fortebio octet 测定抗体的亲和力 |
1周 1周 1周 |
亲和力测定数据 | |
| 6.纳米抗体人源化（通过自主开发软件AbsYs分析抗体可变区并进行抗体人源化设计。） | |||
| A.识别FR、CDR、关键残基、PTMs。 B.通过同源比对，考虑可变区一致性及相似性、关键残基、PTMs、稳定性等因素，选择更好的人源抗体Germline FR作为模板，与羊驼CDR 重组，设计初始人源化抗体。 C.分析抗体序列和结构，确定需要回复突变的关键残基，设计不同数量的回复突变VH。 D.将人源化基因克隆至真核表达载体，转染293瞬时表达获得100-500μg 纯化抗体。 E.结合活性及亲和力检测。 |
6-8周 | 至少一个人源化抗体（亲和力、表达量与原纳米抗体相当） | |
南京钟鼎生物技术有限公司拥有众多商业合作伙伴，深知保密工作对这些公司的重要性，我们极度重视保密性，在与您沟通之前先签署保密协议，并采用多重的防火墙及保障举措，以保护您的隐私权。
保护您的商业机密是钟鼎生物最基本的职业素养!
| 纳米抗体定制案例 | 纳米抗体筛库案例 | 纳米抗体建库案例 |
钟鼎生物提供纳米抗体天然文库构建及筛选相关服务包括：
1.羊驼或骆驼血液收集，PBMC分离，RNA提取及cDNA制备；
2.纳米抗体噬菌体展示文库构建；
3.纳米抗体筛选；
4.纳米抗体表达（原核或真核系统）及纯化。
钟鼎生物亦可以提供制备天然纳米抗体文库的相关原料：：
1.已制备的来源与羊驼及骆驼PBMC的cDNA；
2.来源于5只动物脾脏的高质量的纳米抗体天然文库。