1、产品概述

　　纳米抗体天然文库以10只1-2岁羊驼（空白动物，未注射过免疫原）的血清为材料，经PBMC分离、RNA提取及cDNA反转录，扩增获得VHH基因片段，并构建至噬菌粒载体pComb3XTT中。库容≥2.0×10⁹，VHH片段有效插入率≥99%，VHH抗体的多样性良好，正确率≥93%。

2、试剂盒组成

	组分	规格
1	天然抗体文库	2.5×1013 pfu/ml，0.15 ml（3次）
2	E.coli K12 TG1 host strain	0.2 ml
3	pComb3XTT-F	1 nmol
4	pComb3XTT-R	1 nmol
5	M13KO7 辅助噬菌体	1×1012 pfu/ml, 1 ml
6	Anti-M13 Antibody (HRP), Mouse Monoclonal	100 μg
7	Anti-HA-HRP抗体	50 μl

2.1 天然抗体文库

2.5×10¹³ pfu/ml 。(pfu=plaque forming unit i.e., virions), 0.15 ml。

2.2 E.coli K12 TG1 host strain

[F´traD36 proAB lacIqZΔM15] supE thi-1Δ(lac-proAB)Δ(mcrB-hsdSM)5(rK–mK–)。
添加了终浓度20% 的甘油。 短期存放于-20℃，长期存放（＞30天），建议置于-80℃。0.2 ml。

2.3 扩增、测序引物

pComb3XTT-F：5‘-AGACAGCTATCGCGATTGCAG-3’,1 nmol
pComb3XTT-R：5‘- GCCCCCTTATTAGCGTTTGCCATC -3’,1 nmol

2.4 M13KO7 辅助噬菌体：1×10¹² pfu/ml, 1 ml

M13KO7 是 M13 噬菌体。其具有 P15A 的复制起点和 Tn903 卡那霉素抗性基因，这两个片段插入 M13 的复制起点。 M13KO7 在没有噬菌粒 DNA的条件下也能复制。当存在一个携带有野生型的M13 或 f1 复制起点的噬菌粒时，单链噬菌粒可以完整包装，并分泌到培养基中。该特性使其便于生产用作突变和测序的单链噬菌粒 DNA。 M13KO7携带卡那霉素抗性标记。

2.5 Anti-M13 Antibody (HRP), Mouse Monoclonal：100 μg。

Phage ELISA及Soluble ELISA时，1:20000稀释使用。

2.6 Anti-HA-HRP抗体：50 μl

Phage ELISA及Soluble ELISA时，1:10000稀释使用。

3、存储

-20℃保存，避免反复冻融。

4、实验流程

5、注意事项

1、噬菌体容易污染，实验过程中需要设置阴性对照。
2、使用带有滤芯的枪头及一次性的摇瓶。
3、实验室消毒液交替使用。

6、实验案例

1、库容大：库容≥2.0×10⁹。

2、VHH片段有效插入率≥99%：随机挑取30个单克隆，进行菌液PCR验证，均为阳性克隆。

3、VHH抗体的正确率高，多样性良好：对阳性克隆进行测序验证，并进行进化树分析，正确率≥93%，多样性良好。

图1菌液PCR检测

图2测序结果分析

图3进化树分析

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