纳米抗体相较于传统抗体，具有显著优势，如更低的免疫源性和更佳的组织渗透性。然而，构建纳米抗体免疫库却是一项耗时耗资的工作。免疫周期通常需要长达3至4个月的时间，且饲养羊驼作为抗体来源的成本也相当高昂。这些高门槛使得许多实验室对纳米抗体的研究望而却步。但随着抗体库技术的不断突破，现在已有了纳米抗体合成库这一替代方案，它为我们规避了动物免疫的繁琐过程，为纳米抗体的研究开辟了新的道路。
1、噬菌体载体构建
采用的纳米抗体骨架序列区来自公司构建的羊驼来源、性能良好的天然纳米抗体文库所对应的骨架序列。通过对天然纳米抗体文库的大规模测序，确定了骨架区序列。采用重叠PCR的方法，设计简并引物，扩增获得VHH区，并构建至噬菌粒载体pComb3XTT中，与gene III蛋白融合表达。
图1 噬菌粒pComb3xtt质粒图谱
图2 全合成纳米抗体文库PCR示意图
2、全合成纳米抗体文库的质量鉴定
1）全合成纳米抗体文库库容的鉴定： 2.95×1011
2）VHH 片段插入率的检测 ：100%
3）VHH片段插入正确率和多样性检测：插入成功率＞80%，随机测序的序列均为unique序列，文库的多样性良好。
淘选数据
| Round | Conditions | Input | Output | Output（pfu） | Enriching factor |
| C（1st input）=3.00×1012pfu/ml | |||||
| 1st-P | Target protein:抗原蛋白(5 μg/mL)，一板 Blocking: 文库与2% Milk-PBST反应1h；包被的板子与2% Milk-PBST封闭1h 预吸附：封闭后的文库与封闭后的空板预吸附1h；吸附：取上清，与包被了抗原蛋白 (5 μg/mL)的板子吸附1h Washing: 0.1% Tween20-PBS, 15 times Elution: 0.1M Glycine-HCl, pH2.5，elute15min Neutralization: 1M Tris-HCl |
1.00×1013 | 2.00×106 | 2.88×107 | 3.47×105 |
| C（2nd input）=3.00×1012pfu/ml | |||||
| 2nd-P | Target protein:抗原蛋白(5 μg/mL)，一板 Blocking: 文库与2% Milk-PBST封闭1h；包被抗原的板子与2% Milk-PBST封闭1h 预吸附：封闭后的文库与封闭后的空板预吸附1h； 吸附：取上清，与包被了抗原蛋白 (5 μg/mL)的板子吸附1h Washing: 0.1% Tween20-PBS, 15 times Elution: 0.1M Glycine-HCl, pH2.5，elute15min Neutralization: 1M Tris-HCl |
6.00×1012 | 1.00×107 | 1.44×108 | 4.17×104 |
| C（3rd input）=3.50×1012pfu/ml | |||||
| 3rd-P | Target protein:抗原蛋白(5 μg/mL)，一板 Blocking: 文库与2% Milk-PBST封闭1h；包被抗原的板子与2% Milk-PBST封闭1h 预吸附：封闭后的文库与封闭后的空板预吸附1h； 吸附：取上清，与包被了抗原蛋白 (5 μg/mL)的板子吸附1h Washing: 0.1% Tween20-PBS, 15 times Elution: 0.1M Glycine-HCl, pH2.5，elute15min Neutralization: 1M Tris-HCl |
6.00×1012 | 5.00×107 | 7.20×108 | 8.33×103 |
Phage ELISA 散点图：
抗体纯化图
纯化抗原亲和力检测
基于Biacore T200系统，对纯化后的抗原进行亲和力检测，结果如下所示：
