酵母表达系统是工业微生物中应用较广泛的系统,兼有了原核表达的周期短、成本低廉、易操作等优点,易于工业级别放大培养;同时具备了真核细胞对蛋白的空间折叠,糖基化修饰等能力,使得蛋白可溶性大幅度提高,为研究蛋白的生理活性提供了强有力的工具。
生命科学进入后基因组时代,在许多科研项目中,获得具有空间结构和生物学活性的重组蛋白是非常关键的步骤。虽然原核体系也能获得蛋白,但是由于宿主系统的限制,依然有很大一部分重组蛋白没有活性。
生命科学进入后基因组时代,在许多科研项目中,获得具有空间结构和生物学活性的重组蛋白是非常关键的步骤。虽然原核体系也能获得蛋白,但是由于宿主系统的限制,依然有很大一部分重组蛋白没有活性。
毕赤酵母体系是真核体系中操作简单、成本低廉的系统,在蛋白加工、折叠、翻译后修饰等方面具有诸多优势,在毕赤酵母体系中蛋白转录后糖基化所增加的寡糖链长度(平均每个支链8-14 个甘露糖残基)非常接近高等真核生物的结构,活性几率大大高于原核体系。
钟鼎生物的 ZoonYeast™ 酵母蛋白表达体系具有丰富的宿主细胞资源和载体选择经验,同时改造并开发了的GAP启动子的创新pYE-GAPα载体。进一步改善了蛋白诱导表达的操作步骤,无需在诱导过程中更换培养基,也无需在表达过程中检测甲醇含量,有效的提高细胞密度及蛋白产量。
毕赤酵母体系蛋白表达实验步骤及交付标准 | |||
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载体构建 | 实验周期 | 交付数据和材料 | 价格 |
基因合成 | 基因合成2周 | 1.基因合成报告(含测序结果和酶切验证结果) | 基因合成依市场价 |
亚克隆至表达载体 | 亚克隆2-3周 | 2.含表达质粒的大肠杆菌DH5α,1ml/管*1管 3.表达质粒2ug/管*2管 |
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蛋白表达鉴定 | |||
质粒抽提及线性化 | 表达小试鉴定20个工作日(高拷贝筛选加15个工作日 | 4. 表达鉴定报告,包含: 实验流程阳性菌株PCR鉴定图目的蛋白WB鉴定图 | 质粒抽提线性化?00元 |
电击转化酵母 | 电转、表型确认及阳性菌株筛选?500元 | ||
表型确认 | |||
阳性克隆子筛选(PCR方法) | |||
高拷贝菌株筛选(选做) | 高拷贝菌株筛选?800元(选做) | ||
表达小试(选择1-3株阳性菌株) | 表达小试鉴定?000元 | ||
表达分析鉴定(WB) | 5. 表达菌株(1-3株) | ||
总计(不含载体构建及高拷贝筛选):?300元 | |||
蛋白表达纯化 | |||
放大培养1L | 放大培养鉴定纯化20个工作日 | 6.蛋白纯化流程报告 | 蛋白纯化?500元 |
表达上清液浓缩 | 7.蛋白纯化原始图片 | ||
Ni柱低压亲和纯化 | 8.蛋白(实际纯化得到的蛋白量) | ||
SDS-PAGE分析纯化过程 | |||
WB鉴定纯化后的蛋白 | |||
合计费用:?800.00元(不含目的基因合成及高拷贝菌株筛选) | |||
样本送样须知:如甲方已完成质粒构建,可提供质粒2ug用于开展后续实验。 |
说明:毕赤酵母细胞对密码子偏爱性要求较高,建议进行基因优化后再进行表达以提高成功率
1、正常情况下采用分步收费原则来收取费用,特殊订单承诺不成功不收费(详情请咨询公司技术支持 400-066-8086)
2、不同的蛋白表达量差异很大,我们会尽量提供mg级别以上的蛋白量给客户。
部分客户署名公司发表文章:
1.SARS-CoV-2 envelope protein impairs airway epithelial barrier function and exacerbates airway inflammation via increased intracellular Cl− concentration.Signal Transduction and Targeted Therapy (2024) 9:74(IF=40.8)
2.Malaria oocysts require circumsporozoite protein to evade mosquito immunity.NATURE COMMUNICATIONS | (2022) 13:3208(IF=14.7)
3.Identification and functional characterization of a novel BEL1-LIKE homeobox transcription factor GmBLH4 in soybean.https://doi.org/10.1007/s11240-018-1419-4(IF=12.085)
4.Nanopore efficiently identifies hepatitis D virus antigens in vitro assay.Materials Today Physics 46 (2024) 101479(IF=10)
4.Integration of genome wide association studies and coexpression networks reveal roles of PtoWRKY 42-PtoUGT76C1-1 in trans-zeatin metabolism and cytokinin sensitivity in poplar.New Phytologist (2021) 231: 1462–1477doi: 10.1111/nph.1746(IF=9.4)
5.Targeting HLA-F suppresses the proliferation of glioma cells via a reduction in hexokinase 2-dependent glycolysis.International Journal of Biological Sciences.Published: 2021.03.25.doi:10.7150/ijbs.56357(IF=9.2)
6.Discovery of Clinical Candidate (5-(3-(4-Chlorophenoxy)prop-1-yn-1-yl)-3-hydroxypicolinoyl)glycine, an Orally Bioavailable Prolyl Hydroxylase Inhibitor for the Treatment of Anemia.2020, 63, 17, 10045–10060(IF=7.3)
7.Adenosine Monophosphate-Activated Protein Kinase (AMPK) Phosphorylation Is Required for 20-Hydroxyecdysone Regulates Ecdysis in Apolygus lucorum.Int J Mol Sci. 2023 May 11;24(10):8587. doi: 10.3390/ijms24108587.(IF=6.2)
8.The major-effect quantitative trait locus CsARN6.1 encodes an AAA ATPase domain-containing protein that is associated with waterlogging stress tolerance by promoting adventitious root formation.2018 Mar;93(5):917-930. doi: 10.1111/tpj.13819. Epub 2018 Feb 2.(IF=7.1)
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