毕赤酵母蛋白表达技术服务

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毕赤酵母蛋白表达服务

   酵母P. Pichia 表达系统是工业微生物中应用较广泛的系统,兼有了原核表达的周期短、成本低廉、易操作等优点,易于工业级别放大培养;同时具备了真核细胞对蛋白的空间折叠,糖基化修饰等能力,使得蛋白可溶性大幅度提高,为研究蛋白的生理活性提供了强有力的工具。
   酵母蛋白表达实验过程中,影响实验结果因素很多,诱导时间、诱导温度、目的基因拷贝数、培养条件以及鉴定方法等,都会导致实验结果的区别。任何小小的疏忽,几个月的辛苦将付诸东流,钟鼎生物技术人员具有丰富的经验,能够最大限度发掘酵母菌株的表达潜能,提高表达成功率和表达水平。

钟鼎酵母表达载体说明

  生命科学进入后基因组时代,在许多科研项目中,获得具有空间结构和生物学活性的重组蛋白是非常关键的步骤。虽然原核体系也能获得蛋白,但是由于宿主系统的限制,依然有很大一部分重组蛋白没有活性。
  毕赤酵母体系是真核体系中操作简单、成本低廉的系统,在蛋白加工、折叠、翻译后修饰等方面具有诸多优势,在毕赤酵母体系中蛋白转录后糖基化所增加的寡糖链长度(平均每个支链8-14 个甘露糖残基)非常接近高等真核生物的结构,活性几率大大高于原核体系。
  钟鼎生物具有丰富的宿主细胞资源和载体选择经验,同时改造并开发了的GAP启动子的创新pYE-GAPα载体。进一步改善了蛋白诱导表达的操作步骤,无需在诱导过程中更换培养基,也无需在表达过程中检测甲醇含量,有效的提高细胞密度及蛋白产量。

钟鼎酵母细胞系统蛋白表达服务实验步骤及交付标准

毕赤酵母体系蛋白表达实验步骤及交付标准
1、表达体系系统选择(客户提供表达菌株的略过此步骤,仅提供表达质粒的可选择需要电转化的表达菌株)
1.1、可选表达载体
GAP启动子载体:pYE-GAPα,;
常规商业化载体:分泌表达:pPICZαA、pPIC9K,
胞内表达:pPICZA、 pPIC3.5K
1.2、可选表达菌株
GS115,X33菌株
SMD116蛋白酶缺失型菌株
2、毕赤酵母表达载体构建 交付材料及数据 实验周期 价格
A:基因优化
亚克隆设计
合成基因
B:亚克隆至载体
C: 质粒中抽及线性化-10ug
1、基因合成报告
2、测序验证报告
3、包含表达质粒的大肠杆菌DH5a
4、表达质粒
5、线性化检测图片
基因合成
2周左右
亚克隆
1-2周
线性化 2-3天

酵母蛋白表达服务属于科研型服务项目,为了给您提供更专业、细致的服务支持

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3、毕赤酵母蛋白表达鉴定 交付材料及数据 实验周期
D、电击转化
E、阳性克隆子筛选(PCR法)
F、高拷贝菌株筛选(可选)
G、表达小试(5-10菌株)
H、表达分析鉴定(Dot杂交)
I、定株,优化表达条件
6、阳性表达菌株
7、PCR鉴定阳性菌株图
8、高拷贝阳性菌株(可选)
9、小试表达流程报告
10、Dot Blot实验结果
11、小试表达总结
电转化及鉴定
1-2周
高拷贝筛选
2-3周(可选)

表达小试及鉴定
1-2周
4、毕赤酵母蛋白纯化及鉴定 交付材料及数据 实验周期
J、放大培养2-5升
K、表达上清液浓缩
L、Ni柱低压亲和纯化
M、PAGE分析纯化过程
N、WB鉴定纯化后蛋白
O、PFM检测(可选)
P、MS检测(可选)
12、蛋白纯化流程报告
13、蛋白纯化原始图片
14、发货蛋白
15、Western Blot(标签抗体)
16、蛋白指纹图谱(可选)
17、蛋白质谱分子量(可选)

放大培养
2-3周
蛋白纯化
1-2周
WB 1周
PMF 2-3周
MS 1-2周
说明:毕赤酵母细胞对密码子偏爱性要求较高,建议进行基因优化后再进行表达以提高成功率
1、正常情况下采用分步收费原则来收取费用,特殊订单承诺不成功不收费(详情请咨询公司技术支持 400-066-8086)
2、不同的蛋白表达量差异很大,我们会尽量提供mg级别以上的蛋白量给客户。
3、即使订单失败,我们也会提供全套的实验流程和原始照片,并将表达菌株及表达质粒返还给客户。