酵母双杂交限时活动

一、产品优势

    经验足 经验足:十年建筛库经验,十年中不断优化的操作流程,实验员定点定岗操作经验丰富。

    技术优 技术优:结合了SMART和GATEWAY建库技术的优势,以及基于MMLV逆转录酶特性的Tample-Switch技术,结合自主优化的SMART和GATEWAY三框接头,可满足各种
                            酵母文库构建实验要求。

    周期短 周期短:开发了快速酵母转化试剂,与传统实验方式相比,实验周期至少缩短30%,进度每周不间断更新。

    通量高 通量高:开发了高通量酵母及E.coli转化体系,单轮转化可同时完成96个独立转化。以及高通量质粒纯化体系。

    通量高 性价比高:配制试剂均有自主配方,与传统试剂相比,质量上有独到优势。使我们既能做到高标准交付又能降低产品价格,节省您的科研经费投入。

    配套多 配套多:精心推出3款高品质配套产品(筛选培养基、酵母快速转化试剂、酵母单/双杂库筛材料包),满足您科研中的多样化需求。


二、产品类型

1、酵母文库构建
2、酵母文库筛选
3、点对点验证


三、产品报价

1、酵母文库构建

核蛋白系统酵母双杂交文库构建
实验步骤实验内容周期(工作日)阶段收费
RNA提取RNA提取5QQ技术支持
cDNA文库
①cDNA合成与接头连接15QQ技术支持
②cDNA按长度分离
③重组到酵母双杂交载体pGADT7上
④文库检测
⑤数据整理和分析
总计20QQ技术支持

2、酵母文库筛选

酵母双杂交文库筛选
实验步骤实验内容周期(工作日)阶段收费
自激及毒性活检①诱饵载体的基因合成以及载体构建20QQ技术支持
②诱饵质粒的自激活及毒性检测
文库筛选
①文库质粒转化40QQ技术支持
②酵母杂交及文库筛选
③筛选结果测序
④筛选结果回转验证
⑤数据整理和分析
总计60QQ技术支持

3、点对点验证

酵母双杂交点对点验证
实验步骤实验内容周期(工作日)阶段收费
构建①合成10QQ技术支持
②亚克隆
③直接质粒
转化 转化酵母及杂交10QQ技术支持
验证 4个报告基因验证10QQ技术支持


四、交付标准

1、酵母文库构建

核蛋白系统酵母双杂交文库构建
产品名称交付标准包装形式储存条件
酵母文库甘油菌(文库铺板检测库容量和插入片段长度,通过PCR鉴定转化子的插入片段)
库容:大于1*107CFU
平均插入片段:大于800bp
阳性率:大于90%
1.5ml螺旋管-80℃
文库构建报告电子版Word和PDF格式常温

2、酵母文库筛选

酵母双杂交自激活
产品名称交付标准包装形式储存条件
所有待测基因的酵母双杂交重组质粒DNA各1份2μg质粒和大肠甘油菌
(我司构建质粒)
1.5ml螺旋管-80℃
实验报告(含图)电子版Word和PDF格式常温

酵母双杂交文库筛选
产品名称交付标准包装形式储存条件
酵母双杂交文库筛选结果菌株≤30个阳性克隆质粒
含互作的质粒、质粒的大肠菌株、转化好质粒的酵母菌株
(含测序结果和回转验证结果)
1.5ml螺旋管-80℃
酵母双杂交文库质粒测序结果/电子版常温
文库筛选报告电子版Word和PDF格式常温
文库筛选图片电子版JPG格式常温

3、点对点验证

酵母双杂交点对点
产品名称交付标准包装形式储存条件
重组质粒DNA各一份/1.5ml螺旋管-80℃
实验组酵母菌株各一份/1.5ml螺旋管-80℃
实验报告电子版Word和PDF格式常温

五、材料要求
(样品请尽量多提供,实验剩余可返还)

1、酵母文库构建
构建指定的酵母双杂交cDNA文库,需提供新鲜的组织、细胞或总RNA,标准如下: (需要确保样品新鲜或者新鲜的样品保存良好)
细胞样本:细胞数量大于1*107
植物样本:大于2g
动物样本:大于1g 总RNA:大于200μg

2、酵母文库筛选
仅文库筛选,需提供酵母文库,标准如下:
①质粒>50μg
②阳性率>90%/菌有效库容>107
③诱饵蛋白的基因序列

3、点对点验证
Bait及Prey蛋白的基因序列或Bait及Prey的酵母双杂表达载体



六、周边产品


1、筛选培养基:筛选压力足够、酵母生长快
2、酵母快速转化试剂:转化操作非常简单,实验省时省力
3、酵母单/双杂库筛材料包:可利用材料包建立技术平台



七、案例展示


1、实验内容:
①诱饵载体pGBKT7-ORF1的构建与鉴定
②ORF1自激活检测

案例第一步

③文库转化
④阳性克隆的HIS3、ADE2、AUR1-CMEL1报告基因检测

案例第二步

⑤酵母阳性克隆DNA提取和测序比对
⑥回转验证

案例第三步

2、实验结论:

本项目以ORF1基因cDNA克隆为诱饵,筛选cDNA酵母双杂交文库,在筛选到的13个初始阳性中,经过鉴定结果显示有12个能激活HIS3、ADE2、AUR1-CMEL1报告基因。经过对这些阳性克隆质粒进行DNA测序和BLAST比对分析,结果表明它们分别属于6种不同蛋白的编码基因。 通过对这6株阳性克隆的回转验证检测,结果显示所有阳性克隆都能通过对HIS3、ADE2、AUR1-CMEL1报告基因的回转验证。



八、常见问题解析


1、酵母单杂Y1H和Y187系统有什么区别?

Y1H是Bait整合在基因组上的,Bait质粒(pAbAi)需要先线性化。筛选标记为-Ura,报告基因为AbAr。
Y187系统是在Bait质粒上与Prey互作验证的,Bait质粒(pHis)不需要线性化。筛选标记为-Trp,报告基因为His3。

点击了解更多解答


九、公司简介


南京钟鼎生物技术有限公司成立于2011年,定位生命科学研发和技术转化领域。拥有近5000平方的实验基地,具有独立的分子、蛋白、免疫学实验室、万级细胞房和配套实验仪器房。2018年获得ISO9001认证、江苏省高新技术企业、江苏省企业研究生工作站。

公司介绍