经验足：十年建筛库经验，十年中不断优化的操作流程，实验员定点定岗操作经验丰富。
技术优：结合了SMART和GATEWAY建库技术的优势，以及基于MMLV逆转录酶特性的Tample-Switch技术，结合自主优化的SMART和GATEWAY三框接头，可满足各种
酵母文库构建实验要求。
周期短：开发了快速酵母转化试剂，与传统实验方式相比，实验周期至少缩短30%，进度每周不间断更新。
通量高：开发了高通量酵母及E.coli转化体系，单轮转化可同时完成96个独立转化。以及高通量质粒纯化体系。
性价比高：配制试剂均有自主配方，与传统试剂相比，质量上有独到优势。使我们既能做到高标准交付又能降低产品价格，节省您的科研经费投入。
配套多：精心推出3款高品质配套产品（筛选培养基、酵母快速转化试剂、酵母单/双杂库筛材料包），满足您科研中的多样化需求。
二、产品类型
1、酵母文库构建
2、酵母文库筛选
3、点对点验证
三、产品报价
1、酵母文库构建
| 核蛋白系统酵母双杂交文库构建 | |||
|---|---|---|---|
| 实验步骤 | 实验内容 | 周期（工作日） | 阶段收费 |
| RNA提取 | RNA提取 | 5 | 在线询价 |
| cDNA文库 | |||
| ①cDNA合成与接头连接 | 15 | ||
| ②cDNA按长度分离 | |||
| ③重组到酵母双杂交载体pGADT7上 | |||
| ④文库检测 | |||
| ⑤数据整理和分析 | |||
| 总计 | 20 | ||
2、酵母文库筛选
| 酵母双杂交文库筛选 | |||
|---|---|---|---|
| 实验步骤 | 实验内容 | 周期（工作日） | 阶段收费 |
| 自激及毒性活检 | ①诱饵载体的基因合成以及载体构建 | 20 | 服务热线400-066-8086 或 在线询价 |
| ②诱饵质粒的自激活及毒性检测 | |||
| 文库筛选 | |||
| ①文库质粒转化 | 40 | ||
| ②酵母杂交及文库筛选 | |||
| ③筛选结果测序 | |||
| ④筛选结果回转验证 | |||
| ⑤数据整理和分析 | |||
| 总计 | 60 | ||
3、点对点验证
| 酵母双杂交点对点验证 | |||
|---|---|---|---|
| 实验步骤 | 实验内容 | 周期（工作日） | 阶段收费 |
| 构建 | ①合成 | 10 | 服务热线400-066-8086 或 在线询价 |
| ②亚克隆 | |||
| ③直接质粒 | |||
| 转化 | 转化酵母及杂交 | 10 | |
| 验证 | 4个报告基因验证 | 10 | |
四、交付标准
1、酵母文库构建
| 核蛋白系统酵母双杂交文库构建 | |||
|---|---|---|---|
| 产品名称 | 交付标准 | 包装形式 | 储存条件 |
| 酵母文库甘油菌 | （文库铺板检测库容量和插入片段长度，通过PCR鉴定转化子的插入片段） 库容：大于1*107CFU 平均插入片段：大于800bp 阳性率：大于90% | 1.5ml螺旋管 | -80℃ |
| 文库构建报告 | 电子版 | Word和PDF格式 | 常温 |
2、酵母文库筛选
| 酵母双杂交自激活 | |||
|---|---|---|---|
| 产品名称 | 交付标准 | 包装形式 | 储存条件 |
| 所有待测基因的酵母双杂交重组质粒DNA各1份 | 2μg质粒和大肠甘油菌 （我司构建质粒） | 1.5ml螺旋管 | -80℃ |
| 实验报告（含图） | 电子版 | Word和PDF格式 | 常温 |
| 酵母双杂交文库筛选 | |||
|---|---|---|---|
| 产品名称 | 交付标准 | 包装形式 | 储存条件 |
| 酵母双杂交文库筛选结果菌株 | ≤30个阳性克隆质粒 含互作的质粒、质粒的大肠菌株、转化好质粒的酵母菌株 （含测序结果和回转验证结果） | 1.5ml螺旋管 | -80℃ |
| 酵母双杂交文库质粒测序结果 | / | 电子版 | 常温 |
| 文库筛选报告 | 电子版 | Word和PDF格式 | 常温 |
| 文库筛选图片 | 电子版 | JPG格式 | 常温 |
3、点对点验证
| 酵母双杂交点对点 | |||
|---|---|---|---|
| 产品名称 | 交付标准 | 包装形式 | 储存条件 |
| 重组质粒DNA各一份 | / | 1.5ml螺旋管 | -80℃ |
| 实验组酵母菌株各一份 | / | 1.5ml螺旋管 | -80℃ |
| 实验报告 | 电子版 | Word和PDF格式 | 常温 |
五、材料要求
（样品请尽量多提供，实验剩余可返还）
1、酵母文库构建
构建指定的酵母双杂交cDNA文库，需提供新鲜的组织、细胞或总RNA，标准如下：
（需要确保样品新鲜或者新鲜的样品保存良好）
细胞样本：细胞数量大于1*107
植物样本：大于2g
动物样本：大于1g 总RNA：大于200μg
2、酵母文库筛选
仅文库筛选，需提供酵母文库，标准如下：
①质粒＞50μg
②阳性率＞90%/菌有效库容＞107
③诱饵蛋白的基因序列
3、点对点验证
Bait及Prey蛋白的基因序列或Bait及Prey的酵母双杂表达载体
六、周边产品
1、筛选培养基：筛选压力足够、酵母生长快
2、酵母快速转化试剂：转化操作非常简单，实验省时省力
3、酵母单/双杂库筛材料包：可利用材料包建立技术平台
七、案例展示
1、实验内容：
①诱饵载体pGBKT7-Bait的构建与鉴定
②Bait自激活检测
③文库转化
④阳性克隆的HIS3、ADE2、AUR1-C和MEL1报告基因检测
⑤酵母阳性克隆DNA提取和测序比对
⑥回转验证
2、实验结论：
本项目以Bait基因cDNA克隆为诱饵，筛选cDNA酵母双杂交文库，在筛选到的13个初始阳性中，经过鉴定结果显示有12个能激活HIS3、ADE2、AUR1-C和MEL1报告基因。经过对这些阳性克隆质粒进行DNA测序和BLAST比对分析，结果表明它们分别属于6种不同蛋白的编码基因。 通过对这6株阳性克隆的回转验证检测，结果显示所有阳性克隆都能通过对HIS3、ADE2、AUR1-C和MEL1报告基因的回转验证。
八、常见问题解析
1、酵母单杂Y1H和Y187系统有什么区别？
Y1H是Bait整合在基因组上的，Bait质粒（pAbAi）需要先线性化。筛选标记为-Ura，报告基因为AbAr。
Y187系统是在Bait质粒上与Prey互作验证的，Bait质粒（pHis）不需要线性化。筛选标记为-Trp，报告基因为His3。
九、公司简介
南京钟鼎生物技术有限公司成立于2011年，定位生命科学研发和技术转化领域。拥有近5000平方的实验基地，具有独立的分子、蛋白、免疫学实验室、万级细胞房和配套实验仪器房。2018年获得ISO9001认证、江苏省高新技术企业、江苏省企业研究生工作站。
