1、酵母单杂Y1H和Y187系统有什么区别？
Y1H是Bait整合在基因组上的，Bait质粒（pAbAi）需要先线性化。筛选标记为-Ura，报告基因为AbAr。
Y187系统是在Bait质粒上与Prey互作验证的，Bait质粒（pHis）不需要线性化。筛选标记为-Trp，报告基因为His3。
2、酵母双杂交AH109和Y2H系统有什么区别？
| 系统 | AH109 | Y2H |
|---|---|---|
| 杂交方法 | 共转化 | 杂交 |
| 报告基因 | His3、Ade2、LacZ | His3、Ade2、AbAr、Mel1 |
| 优点 | 筛选后的重复数目比较少验证成本低。 | 文库菌可以使用百次以上杂交效率更高报告基因筛选体系更严格，大大减少假阳性。 |
| 缺点 | 杂交效率偏低使用文库质粒，能用的次数少。 | 建库终产物没有质粒，验证成本高。 |
| 推荐使用 | 一对一验证 | 库筛 |
3、酵母营养缺陷型中的二缺、四缺都是什么？
| 营养缺陷型标记 | 对应条件 |
|---|---|
| -Trp | pGBKT7质粒、pHis质粒 |
| -Leu | pGADT7质粒 |
| -His | 双杂Y2H报告基因、单杂Y187报告基因 |
| -Ade | 双杂Y2H报告基因 |
| -Ura | pAbAi质粒 |
| 酵母核体系双杂交-Y2HGold体系 | 单缺（SD-Trp、SD-Leu） | 用于单转化的营养缺陷型筛选标记，只用于筛选单转化成功的质粒，不能确定目的基因表达与否。 |
|---|---|---|
| 双缺（DDO） | 用于筛选含BD和AD的杂交菌株，只能确认知否同时含BD和AD质粒，不能确定是否互作。 | |
| 四缺（QDO） | 初步判定是bait和prey是否存在互作。 | |
| QDO/A | His3营养缺陷筛选后，会有大量假阳性，加入独立的Gal4启动子调控的AbAr，筛选条件会进一步严格。 如果杂交后直接在QDO/A上筛选，会由于突然过于严格的筛选条件导致互作较弱的酵母不会生长。 |
|
| 酵母核体系双杂交-AH109体系 | 单缺、双缺、四缺同上 | 单缺、双缺、四缺同上 |
| 单杂交Y187系统 | 单缺（SD-Trp、SD-Leu） | 用于单转化的营养缺陷型筛选标记，只用于筛选单转化成功的质粒，不能确定目的基因表达与否。 |
| 双缺（DDO） | 用于筛选含pHis和pGADT7的菌株 | |
| 三缺（TDO）+3-AT | 报告基因His3检测互作情况。3-AT见Q4 |
4、3-AT的作用时什么？
①3-AT是组氨酸的竞争性抑制剂，可以抑制His3的泄露表达和轻微自激活现象。
②一般Y2H双杂体系中不存在泄露表达，使用3-AT情况较少，AH109同理。常规自激活检测不会进行3-AT浓度抑制检测，存在自激活情况时才会进行3-AT浓度抑制检测。
③单杂Y187体系，一般都会有泄露表达和自激活情况，需要0~100mM的3-AT梯度检测。没有特殊说明按常规梯度浓度设置。
④单杂Y1H体系，报告基因不是组氨酸营养缺陷型，无需做3-AT自激活检测。但是报告基因AbA需要设置梯度浓度自激活检测。
5、单双杂系统较多，如何选择？
①您如果没有特殊要求：
| 系统 | 体系选择 |
|---|---|
| 双杂一对一验证 | AH109体系 |
| 双杂库筛 | Y2H体系 |
| 单杂一对一和库筛 | Y187 |
②如果您对双杂交的杂交方法或共转化方法有特殊要求或偏好，或对单杂启动子位于质粒或基因组有明确要求，或其他特殊要求，我们也可以提供定制服务。钟鼎生物有多项关于新型酵母双杂技术的合作开发，有多种高通量“库筛库”技术体系，经验丰富，欢迎您的咨询。
6、贵公司能否进行表达鉴定？
可以对Gal4 DNA-BD和Gal4 AD进行WB检测。
7、我对实验设计和图片有特殊要求，公司可否满足？
①如果您对实验设计有要求，需提前向我们说明，我们会根据实际情况给您答复。
②图片我们会尽量满足您的要求。但受限于拍摄器材，如果仍无法满足您的要求，我们可以寄送材料给您自行拍摄。