蛋白质N-端测序服务
Edman降解法 · ABI Procise491蛋白序列测序系统 · 1-2周交付 · 2500元起（含5AA）
几乎所有的蛋白合成都起始于N-端，蛋白质N-端的序列组成对于蛋白质整体的生物学功能有着巨大的影响力。例如N-端序列影响蛋白质的半衰期，同时关联着蛋白亚细胞器定位等，这些与蛋白的功能和稳定性息息相关。对蛋白进行N-端测序分析，有利于帮助分析蛋白质的高级结构，揭示蛋白质的生物学功能。
目前蛋白N-端测序主要分为两大类：其一是非质谱技术，例如经典的Edman降解法、利用反转录RT-PCR得到对应蛋白的cDNA再反推蛋白序列；其二是质谱技术。两者各有长处和制约之处。钟鼎生物采用基于经典Edman降解法原理的测序方案，利用美国ABI公司Procise491蛋白序列测序系统进行蛋白质N-端测序，结果稳定、可解读性强。
服务详情与报价
| 服务编号 | 服务项目 | 检测方法 | 周期 | 报价 |
|---|---|---|---|---|
| BA101 | 蛋白质N-端测序 | Edman降解法（ABI Procise491蛋白序列测序系统） | 1–2周 | 询价 |
服务优势
经典方法，结果可靠
基于成熟的Edman降解法原理，逐轮循环读取N端氨基酸，结果可解读性强，适合作为蛋白N端信息的参考依据。
进口测序系统
使用美国ABI公司Procise491蛋白序列测序系统，仪器状态稳定，数据重复性好。
周期明确，报价透明
服务编号BA101，1–2周交付，2500元起（含5AA），超出部分按实际工作量补充报价。
技术团队支持
可根据样品来源、纯度、缓冲液体系与已知序列信息，协助判断送样方案与测序可行性。
检测原理：Edman降解法
Edman降解法是通过化学试剂从蛋白质N端逐个切除氨基酸残基并进行鉴定的经典测序方法。钟鼎生物在ABI Procise491蛋白序列测序系统上完成全流程自动化，核心步骤如下：
- 偶联：异硫氰酸苯酯（PITC）在碱性条件下与蛋白质N端氨基酸的α-氨基反应，生成苯氨基硫甲酰衍生物（PTC-肽）。
- 切割：三氟乙酸（TFA）处理，使N端第一个氨基酸残基选择性裂解，生成噻唑啉酮苯胺（ATZ-氨基酸）。
- 转化：ATZ-氨基酸在酸性条件下转化为稳定的乙内酰苯硫脲氨基酸（PTH-氨基酸）。
- 鉴定：PTH-氨基酸经在线HPLC分离与检测，与标准品比对确定该位点氨基酸种类。
- 循环：剩余肽链暴露出新的N端，重复上述步骤，即可逐个测定N端氨基酸序列。
非质谱与质谱两类N端测序方法的比较
| 方法类别 | 代表技术 | 主要特点 |
|---|---|---|
| 非质谱技术 | Edman降解法 | 从N端逐残基测序，结果直接、可解读性强；要求样品纯度较高，N端封闭或糖基化样品难以测序。 |
| 非质谱技术 | 反转录RT-PCR反推序列 | 通过cDNA序列反推蛋白序列，依赖核酸信息，无法反映翻译后加工与N端实际剪切情况。 |
| 质谱技术 | 质谱肽段测序 | 通量高、可覆盖内部序列，擅长未知蛋白鉴定与修饰分析；对N端封闭样品的N端信息获取能力有限。 |
送样要求
1. 样品形式
- 可提供蛋白冻干粉、蛋白溶液，或固定在PVDF膜上的蛋白（NC膜不可以）。
- 如提供转膜的蛋白质，需用去离子水充分洗涤干净，同时保证每条膜上蛋白量大于 1 µg。
2. 样品量与纯度
- 请确保蛋白浓度大于 1 mg/ml，最小量不得低于 10 pmol，蛋白纯度最好大于 90%。
- 参考换算：50 kD的蛋白，10 pmol约相当于 0.5 µg。
- 测序样品不返还，请保留备份。
3. 缓冲液与杂质
- 蛋白溶液不含盐、缓冲液、变性剂（SDS）等杂质。
- 如果使用缓冲液，请务必标明样品缓冲液的成分。
- 样品最好溶解在 10–30 µL 挥发性溶剂中，或直接提供冻干样品。
4. 补充信息
- 如果已知蛋白表观分子量或理论蛋白质序列，请一并说明，以提高测序成功率。
服务说明与适用范围
1、样品纯度不能太低，经验认为纯度大于90%的蛋白才适用于测序反应。
2、N端封闭或糖基化的蛋白质难以进行Edman反应，无法测序。
典型应用场景
- 验证重组蛋白N端序列是否正确，确认起始密码子之后的实际剪切位点。
- 判断蛋白N端是否发生封闭（如甲酰化、乙酰化）或糖基化修饰。
- 补充新蛋白或未知蛋白的N端序列信息，为后续功能研究提供依据。
- 评估多肽合成、蛋白纯化等工艺过程中N端序列的一致性。
常见问题 FAQ
蛋白质N-端测序的原理是什么？
钟鼎生物的蛋白质N-端测序基于经典Edman降解法原理：异硫氰酸苯酯（PITC）在碱性条件下与蛋白质N端氨基酸的α-氨基偶联，生成PTC-肽；三氟乙酸（TFA）选择性切割N端残基，生成ATZ-氨基酸；ATZ-氨基酸转化为稳定的PTH-氨基酸后经HPLC鉴定，确定该位点氨基酸种类；剩余肽链暴露新的N端，循环重复即可逐个读取N端序列。检测使用美国ABI公司Procise491蛋白序列测序系统。
哪些样品无法进行N-端测序？
Edman降解法存在两类主要限制：一是样品纯度不能太低，经验认为纯度大于90%的蛋白才适合测序反应；二是N端封闭或糖基化的蛋白质难以进行Edman反应，无法直接测序。此外，样品中若含有盐、缓冲液、变性剂（如SDS）等杂质，也会影响测序结果。
N-端测序送样有什么要求？
可提供蛋白冻干粉、蛋白溶液，或固定在PVDF膜上的蛋白（NC膜不可以）。转膜样品需用去离子水充分洗涤干净，每条膜上蛋白量大于1 µg。蛋白浓度需大于1 mg/ml，最小量不得低于10 pmol，纯度最好大于90%（例如50 kD的蛋白，10 pmol约相当于0.5 µg）。蛋白溶液应不含盐、缓冲液、变性剂（SDS）等杂质；若使用缓冲液，请务必标明成分。样品最好溶解在10–30 µL挥发性溶剂中，或直接提供冻干样品。如已知蛋白表观分子量或理论序列，请一并说明以提高测序成功率。测序样品不返还，请自行保留备份。
N-端测序的周期和价格是多少？
钟鼎生物蛋白质N-端测序服务编号BA101，交付周期为1–2周，报价2500元起（含5AA，即含5个氨基酸残基的测序）。超出5AA或样品需要额外处理时，具体费用可在线询价确认。
测序样品在检测完成后可以返还吗？
不可以。N-端测序属于消耗性检测，测序样品不返还，建议客户在寄送前自行保留备份样品，以免影响后续实验。
N-端测序能测出多少个氨基酸？
标准服务报价含5AA（5个氨基酸残基）。Edman降解法理论上可以连续测定多个残基，但实际可读取长度受样品纯度、N端封闭比例、初始蛋白量等因素影响，逐轮循环的信号衰减会限制可读长度。若需要更长读长，可在报价基础上追加测定。
为什么PVDF膜可以用于N-端测序而NC膜不可以？
Edman降解法需要样品牢固固定在固相载体上并耐受有机溶剂和酸碱性试剂。PVDF膜化学稳定性好、蛋白结合牢固，适合直接放入测序仪反应腔进行循环降解；NC（硝酸纤维素）膜在测序反应条件下易溶解或干扰反应，因此不能用于N-端测序。
如果蛋白N端被封闭了怎么办？
N端封闭（如甲硫氨酸被甲酰化、N端乙酰化）或N端糖基化的蛋白难以直接进行Edman降解，无法获得N端序列。可在送样前告知样品来源与表达系统，由钟鼎生物评估是否可通过去封闭处理、酶切暴露新N端或改用质谱方案进行序列分析。