选择宿主时，一般要考虑两个问题：

▲ 钟鼎生物可提供的多物种多克隆抗体制备宿主

钟鼎生物目前能够提供的多物种多克隆抗体制备包括：

• 降解的蛋白抗原利于制备用于筛选细菌表达 cDNA 文库或免疫沉淀。
• 用于筛选真核细胞转染系统表达的 cDNA 文库或免疫沉淀，最好选用自然的蛋白抗原。
• 如果制备抗独特型抗体，所用抗原可以是可溶性 Ig 分子，或者是完整的细胞，也可以是基因工程表达产品独特型决定簇、人工合成多肽及抗原化抗体等。

目前，以各类病原生物活体感染宿主而获得多克隆抗体（抗血清）作为检测抗体，仍是常用方法。

1. 成本低廉，技术门槛低，制备周期短。
2. 能识别一个抗原上的多个表位，可在 IP 等实验中获得更加理想的结果。
3. 多抗因为靶蛋白可在多个表位上结合不止一个抗体分子，有助于放大低表达水平的靶蛋白信号。
4. 能识别出与免疫原蛋白具有高同源性的蛋白，或者从非免疫原物种的组织样品中筛选靶蛋白，例如当未测试物种中的抗原性质未知时，有时会使用多克隆抗体。
5. 可识别多个结构域，即使原始抗原的一些空间结构或者序列发生小变化或者部分抗原决定簇变化，仍可以识别抗原，因此有更大的适应性。

▲ 多抗可识别多个表位，信号放大效果更佳

▲ 常见杂带成因示意

1. Protein A/G 纯化引入杂带：这种纯化方式得到的多抗掺杂有宿主本身对其自身抗原产生的抗体，这些抗体在检测中会识别样本中的蛋白而出现杂带，建议采用抗原亲和纯化来避免杂带的产生。
2. 翻译后修饰：天然蛋白存在复杂的翻译后修饰，可以通过信息学分析来解释。
3. 蛋白前体切割：翻译后蛋白前体经切割可能会使部分蛋白分子量偏小，而天然组织中同时存在蛋白前体和切割加工后的蛋白，二者序列有相同部分，可能会产生杂带。最好是通过查阅与目的蛋白相关文献进行了解。
4. 同源家族蛋白/剪接异构体：当目的蛋白有同源家族蛋白时，蛋白异构体的存在可能会使分子量偏离预测分子量，因为天然样本中由同一个 mRNA 不同的剪接方式进行翻译形成的蛋白产物也会有相同的抗原表位，同时被抗体识别时会产生杂带。
5. 蛋白间相互作用：强烈的蛋白间相互作用在还原条件下也有可能不解聚导致条带偏大。如二聚体或三聚体，这些多聚体的形式通常会抵制 WB 时所做的还原条件，因此造成检测的条带偏大。

我们的抗体是添加 5% 甘油，免疫前血清和抗血清已添加 0.02% 防腐剂，若客户有其他要求，会提前告知生产；抗体会超低温包装运输寄送，收到抗体请尽快检测，建议分装成小包装（分装为每次使用量）后保存于 -80 摄氏度冰箱，并避免反复冻融，保存时间若超过 1 年，使用前请先电泳检测蛋白是否降解。

制备抗体的抗原是原核重组表达的蛋白，与后续用于 WB 的天然蛋白样品是有差异的，无法保证构象及活性与天然蛋白一致，所以不能保证后续应用于天然蛋白的 WB，但可以保证制备出的抗体与抗原蛋白是 WB 呈阳性的。

• 抗原设计：选择序列特异性高的区域，避免与宿主蛋白同源。
• 抗原亲和纯化：用固定化抗原从抗血清中纯化特异性抗体，可显著提高特异性。
• 多肽抗原：使用短肽抗原可减少交叉反应。
• 免疫前血清对照：检测免疫前血清的交叉反应背景。
• 效价检测：在采血前检测效价，确保抗体质量。

• 抗原免疫原性不足：小分子多肽需偶联 KLH 等载体蛋白。
• 抗原用量不足或过多：用量不足无法激发免疫应答，用量过多可能导致免疫耐受。
• 宿主与抗原亲缘关系过近：同源性过高导致免疫系统无法识别为异物。
• 佐剂使用不当：佐剂乳化不完全或使用错误类型。
• 免疫途径不当：皮下、肌肉、腹腔等途径选择不当。
• 宿主健康状态不佳：动物年龄、营养状况、应激等因素影响免疫应答。

多克隆抗体制备是一项系统工程，从宿主选择到抗原设计，再到纯化与保存，每一步都影响最终抗体的质量。希望这篇 FAQ 能帮你理清思路，实验顺利。如有更多问题，欢迎联系钟鼎生物技术团队。