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多肽抗原如何高效制备多克隆抗血清？本案例以客户提供的多肽A为起点，通过KLH偶联、新西兰白兔免疫、抗血清效价检测等完整流程，最终获得高效价特异性多克隆抗血清。案例涵盖HPLC/MS质检数据与ELISA效价曲线，为类似项目提供可参考的标准化路径。
01实验目的
以客户在钟鼎制备的多肽A为抗原，偶联KLH免疫新西兰白兔，获得特异性多克隆抗血清。
多肽抗原优势：序列明确、纯度可控、免疫原性可通过偶联载体蛋白增强，特别适合难以表达或纯化的靶蛋白。
02实验设计
- 设计多肽序列，合成多肽，多肽偶联KLH；
- 免疫2只新西兰大白兔，3-4次免疫，收取抗血清；
- 抗血清效价检测。
1
多肽设计
与合成
与合成
2
KLH偶联
与质检
与质检
3
新西兰白兔
3-4次免疫
3-4次免疫
4
抗血清
采集
采集
5
ELISA
效价检测
效价检测
▲ 多克隆抗血清制备完整流程
03多肽合成与质检
3.1 合成多肽HPLC检测结果
| Sample ID: | ZD2018D00XXXX | |
| Sequence: | XXXXXXXXXXXX-C | |
| Column: | 4.6mm*250mm, GS-120-5-C18-BIO | |
| Calculation Type: | Percent | |
| Solvent A: | 0.1% Trifluoroacetic in 100% Acetonitrile | |
| Solvent B: | 0.1% Trifluoroacetic in 100% water | |
| Gradient: | A | B |
| 0.00min 12% | 88% | |
| 25min 37% | 63% | |
| 25.1min 100% | 0% | |
| 30min stop | ||
| Flow rate: | 1.0ml/min | |
| Wavelength: | 220nm | |
| Volume: | 10ul |
▲ 合成多肽HPLC纯度检测结果
3.2 合成多肽MS检测
| MW: | 1543.73 | Probe bias: | -3.5kv |
| Probe: | ESI | Detector: | 1.0kv |
| DL: | -20.0v | T.Flow: | 0.2ml/min |
| DL Temp: | 250℃ | B.conc: | 50%H2O/50%ACN |
| Block Temp: | 200℃ |
质检要点：多肽纯度建议≥85%（HPLC），质谱分子量需与理论值一致。若纯度不足，残留杂质可能影响免疫效果和抗体特异性。
04抗血清效价检测结果
包被抗原：多肽A
包被浓度：5 μg/ml，100 μl / 孔
包被缓冲液：磷酸盐缓冲液 (PBS，pH 7.4)
二抗：山羊抗兔-HRP，1/5000
▲ 抗血清ELISA效价检测曲线
起始稀释度: 1:500
效价即样品OD/空白OD ≥2.1的最高稀释度
效价判定标准：以样品OD值与空白OD值之比≥2.1的最高稀释度作为抗血清效价。本案例效价达121.5K，满足后续WB、ELISA等常规检测需求。
05实验结论
通过ELISA检测效价得出，多肽A抗血清效价在121.5K左右。
2
免疫兔只数
3-4
免疫次数
121.5K
ELISA效价
本案例成功制备了高效价多克隆抗血清，验证了多肽+KLH偶联免疫策略的可行性，可为同类多肽抗原项目提供参考。
结语
多肽抗原制备多克隆抗血清是一种高效、可控的技术路线。从多肽设计、KLH偶联到免疫与效价检测，每个环节都需要精细把控。钟鼎生物拥有丰富的多克隆抗体制备经验，欢迎咨询定制方案。
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