一、仪器和试剂耗材
1、仪器：Biacore
2、试剂与耗材：CM5 Sensor 、氨基偶联试剂盒、醋酸钠缓冲溶液（pH4.0/pH4.5/pH5.0）、10x PBS-P+、96 孔板、96 孔板封口膜。
二、SPR 实验原理简介
Biacore 系统基于表面等离子共振技术（SPR），实时记录分子结合和解离过程中传感芯片表面分子质量发生的变化，从而实时地监测分子间的相互作用。为了研究两个分子之间的相互作用，其中一个分子被固定到芯片表面上（Ligand），而另一个分子（analyte）以溶液的形式连续流过芯片表面，检测器能实时检测溶液中的分子与芯片表面的分子结合、解离过程，并以 SPR 响应值的形式显示。
1、全内反射的条件下，入射光造成薄金层等离子体发生共振，导致反射光在某一特定角度（SPR 角）能量低至几乎为零。
2、SPR 角对金膜溶液测 100-200 nm 范围内的折光率变化非常灵敏。
3、分子间可逆的结合/解离造成金膜附近折光率的实时变化，这一现象被Biacore 实时记录。
4、Biacore 类似一个高精度的光学天平，通过 SPR 原理放大信号，能检测芯片表面 1pg/mm2 的物质变化。
将蛋白氨基偶联到芯片上后，分析物小分子注射到芯片表面和蛋白结合产生结合信号，停止注射后从小分子从芯片解离，信号回到基线。
三、实验流程
1、实验样品
（1）蛋白样品
| 名称 | 分子量 | 规格 |
| 蛋白 A | 50 kDa | 0.5mg/mL*1 mL |
（2）待测物样品
| 名称 | 分子量 | 规格 |
| 小分子 B | 530.34 | 0.5mg*2 |
2、实验方法
拟采用氨基偶联法进行蛋白固定；
蛋白偶联缓冲溶液：1.0×PBS-P+（pH7.4）
互作缓冲溶液：1.0×PBS-P+（pH 7.4），5% (v/v) DMSO
2.1 蛋白偶联
(1) 将运行缓冲液 (200 mL 1×PBS Buffer)、水瓶、废液瓶分别放置在左右托盘中，并插入相应的进液管。
(2) 手持 CM5 芯片，有字的一面朝上。按照芯片上的箭头方向，将芯片轻轻推入卡槽，最后合上芯片舱的舱门。
(3) 用 1-乙基-3-(3-二甲基氨基丙基) 碳二亚胺 (EDC，Cytiva) 和 N-羟基琥珀酰亚胺 (NHS，Cytiva) 以 10 μL/min 的流速激活芯片 4 号通道。
(4) 将配体蛋白用醋酸钠稀释至 200 μg/mL，以 10 μL/min 的流速将蛋白固定在芯片的 4 通道，生成偶联图。
(5) 用乙醇胺以 10 μL/min 的流速封闭通道。
2.2 蛋白与待测物相互作用测试
(1)溶剂校正：
待测物的运行缓冲液选用含 5% DMSO 的 1×PBS-P+，将系统左侧托盘中的原运行缓冲液换成含 5% DMSO 的 1×PBS-P+，并插入相应的进液管。按照下表混合 4.5% 和 5.8% 母液配置 5% DMSO 浓度校正曲线：
| Buffer/Vial | 1 | 2 |