地高辛（Digoxigenin，DIG）又称异羟基洋地黄毒甙元，是一种类固醇半抗原分子。地高辛标记的探针是一种非放射性探针。

▲ 地高辛（Digoxigenin，DIG）的类固醇半抗原结构

为什么"半抗原"这个身份对探针标记如此关键？可以从三个层面理解：

• 没有内源干扰。地高辛只存在于洋地黄属植物中，动物、细菌、常规培养细胞中都不存在内源性 DIG，因此检测时不会出现"样本本身就有信号"的假阳性。
• 可以被高特异性抗体识别。作为半抗原，DIG 本身免疫原性弱，但偶联到载体蛋白后可以制备出高亲和力、高特异性的抗地高辛抗体，这正是检测体系的"识别端"。
• 分子小、偶联方便。DIG 可以通过连接臂偶联到 dUTP 或 UTP 上，形成 DIG-dUTP / DIG-UTP，再通过聚合酶反应掺入到探针核酸链中，不显著影响杂交性能。

先使探针片段带有地高辛，再与抗地高辛物质发生反应，使探针上带有抗地高辛复合物的分子，然后进行其他反应。

带有地高辛标记的三磷酸脱氧尿苷（DIG-dUTP）通过缺口翻译、随机翻译或 PCR 等反应而使探针核酸片段带有地高辛，进一步可与带有 AP、CSP 等各种抗地高辛抗体复合物发生免疫反应，使探针上带有 AP 等分子，催化化学或发光反应。

对于目的 DNA 或 RNA 来说，分子杂交后，杂交部分可通过 ELISA 实验程序加以检测，显示出杂交部分。

DNA 探针的标记方法：随机引物法、PCR 掺入法、寡核苷酸探针的标记方法（3' 或 5' 末端标记法、3' 末端加尾法）；RNA 探针的标记方法：通常采用体外转录体系，在转录过程中以 DIG-UTP 部分替代 UTP 掺入。

DNA 地高辛步骤：标记探针 → DNA 转移与固定 → 杂交 → 免疫测定 → 再次杂交。

化学发光检测：通过 X 光片记录信号。步骤如下：

地高辛标记特点

• 安全——产生的废物无需特殊处理；
• 稳定——标记探针可保存一年左右，且可重复使用；
• 灵敏度高——可标记 DNA、RNA 两类探针；
• 实验分析时间短——无需放射性自显影的长周期等待。