人工纳米抗体合成文库

≥2.2×10¹⁰

文库库容

超大容量，覆盖丰富多样性

≥95%

VHH有效插入率

菌液PCR验证，片段正确插入

≥90%

正确率

测序验证 + 进化树分析

任意靶标

适用对象

蛋白 · 小分子 · 细胞表面受体

1 产品概述

基于羊驼天然纳米抗体（VHH）基因序列，通过CDR区随机突变构建的高质量合成文库

人工纳米抗体合成文库是基于羊驼天然纳米抗体（VHH）的基因序列，通过在CDR区引入随机突变序列（NNK），以pComb3XTT为载体构建的人工纳米抗体合成文库。库容≥2.2×10¹⁰，VHH片段有效插入率≥95%，重组VHH抗体文库的多样性良好，正确率≥90%。可针对任意靶标（蛋白、小分子、细胞表面受体等）筛选出高亲和力、高稳定性的纳米抗体。

2 试剂盒组成

提供完整的噬菌体展示筛选试剂盒组分

#	组分	规格
1	人工纳米抗体合成噬菌体文库	6.0×10¹² pfu/ml · (3-5次)
2	E.coli K12 TG1 host strain	0.2 ml (20%甘油)
3	pComb3XTT-F	1 nmol
4	pComb3XTT-R	1 nmol
5	M13KO7 辅助噬菌体	1×10¹² pfu
6	Anti-M13 Antibody (HRP), Mouse Monoclonal	50 μL
7	Anti-His-HRP 抗体	50 μL

详细组分说明：人工纳米抗体质粒文库 6.0×10¹² pfu/ml · 0.9 ml；E.coli K12 TG1 添加终浓度20%甘油，短期-20℃、长期-80℃保存；引物pComb3XTT-F/R各1 nmol；M13KO7辅助噬菌体携带卡那霉素抗性标记；Anti-M13-HRP用于Phage ELISA（1:10000稀释），Anti-His-HRP用于Soluble ELISA（1:1000稀释）。

3 存储

-20℃保存，避免反复冻融。

4 实验案例 & 质控数据

严格的质控流程确保文库质量

库容 & 插入率 &正确率

库容大：库容≥2.2×10¹⁰，为下游筛选提供充足多样性。

图1 菌液PCR检测

VHH 片段有效插入率≥95% ：随机挑取 30 个单克隆，进行菌液 PCR 验证

图2 测序结果分析

VHH 抗体的正确率高，多样性良好：对阳性克隆进行测序验证，并进行进化树分析，正确率≥90% ，多样性良好。

多样性

图3 进化树分析
VHH抗体序列多样性良好

5 常规试剂（自配） & 仪器设备

常规试剂

LB Medium (10g胰蛋白胨, 5g酵母提取物, 10g NaCl) · Amp/Kana 0.1mg/mL
2×YT Medium (16g胰蛋白胨, 10g酵母提取物, 5g NaCl)
2×YT-AI-M13K07 含Amp, IPTG 1mM, M13K07 5×10⁹个/mL
PEG/NaCl (200g PEG-8000, 146.25g NaCl) / 4℃
Blocking Buffer 2%脱脂牛奶 (或酪蛋白/OVA)
Elutioning Buffer 0.1M甘氨酸 pH2.5
1×PBS / PBST (含0.05% Tween-20)
中和液 1M Tris-HCl pH7.5
1×TES Buffer (0.2M Tris-HCl pH8.0, 0.5mM EDTA, 0.5M 蔗糖)

仪器设备

全温培养摇床分光光度计超净台水浴锅离心机金属浴高速冷冻离心机 PCR仪洗板机酶标仪

6 实验流程（概要）

标准噬菌体展示淘选与筛选流程

Day One-1 第一轮文库淘选：抗原包被 → 封闭 → 预吸附 → 吸附 → 洗脱 → 滴度检测

Day One-2 噬菌体滴度检测：TG1预培养 → 梯度稀释 → 平板计数

Day Two 噬菌体救援：TG1感染 → 辅助噬菌体感染 → 过夜培养

Day Three 噬菌体纯化：PEG/NaCl沉淀 ×2 → PBS重悬 → 滴度检测

Day Four 第二轮文库淘选：重复淘选（共3-4轮）→ 富集因子计算

Phage ELISA：单克隆上清制备 → 抗原包被 → 检测 (Anti-M13-HRP)

Soluble ELISA：周质上清制备 → Anti-His-HRP检测

测序鉴定：菌液PCR扩增 → 测序 → 序列分析

详细步骤请参阅产品说明书。如需进一步蛋白验证，可提供无细胞表达服务（500元/株）。

7 注意事项

噬菌体容易污染，实验过程中需要设置阴性对照。
使用带有滤芯的枪头及一次性的摇瓶。
实验室消毒液交替使用，避免噬菌体交叉污染。
TG1菌株需在无抗平板划线活化，使用前确认无污染。