酵母三杂交（Y3H）系统可用于细胞内核酸水平的实验验证。与酵母双杂交系统相比，它的应用范围更广。用于研究两种蛋白和第三种成分之间的相互作用，可以是蛋白质、RNA 或小分子。同时，通过菌落的生长状态可以研究第三种成分对其他两种蛋白质的作用方式（如促进或抑制）。

酵母三杂交原理

酵母三杂交系统的原理基于三个主要部分：一个激活域（通常是Gal4的激活域），一个DNA结合域（通常是Gal4的DNA结合域），以及一个抑制域（可以是任何能够抑制激活域功能的序列）。当这三个部分被融合到同一个载体上，并且这个载体被引入到酵母细胞中时，如果存在特定的蛋白质-蛋白质、蛋白质-RNA或蛋白质-小分子化合物之间的相互作用，那么这种相互作用将导致激活域的功能被抑制，从而使得含有DNA结合域的报告基因得以表达，表现为酵母细胞的某些表型变化，如颜色变化或生长速率的变化。

服务详情

酵母三杂交服务详情
服务步骤	交付材料	周期（工作日）	报价
A、诱饵载体的构建	1、诱饵质粒 2、自激活检测图片 3、初筛图片 4、复筛图片 5、测序及分析结果+阳性克隆菌液 6、验证图片+验证的AD质粒 7、验证图片 8、项目报告	80	询价
B、诱饵质粒的自激活检测
C、文库质粒和诱饵质粒共转酵母感受态细胞
D、文库筛选和3AT优化
E、文库筛选结果测序分析
F、初筛筛选结果回转验证
G、详细报告的整理和数据发送

案例介绍

1.以小分子作为介导的三杂交系统

参考文献：Yeast Three-Hybrid Screening for Identifying Anti-Tuberculosis Drug Targets

抗结核药物的靶点解旋是一项极具挑战性的任务。作者应用酵母三杂交技术确定了病原体的蛋白质靶标。该系统采用随机破碎的细菌 DNA 文库，为靶标鉴定提供了一种技术上简单的替代方法。

2.以蛋白作为介导的三杂交系统

参考文献：Arabidopsis phytochromes A and B synergistically repress SPA1 under blue light

在拟南芥中，尽管研究已经证明植物色素 A（phyA）和 phyB 参与了蓝光信号转导，但蓝光激活的植物色素如何调节 COP1-SPA1 E3 复合物的活性在很大程度上仍然是未知的。在这里，作者使用酵母三杂交实验发现在蓝光下，phyB 或 HY5 与 SPA1 的结合强度会相互降低。进而发现 phyA 对早期和弱蓝光有反应，而 phyB 则对持续和强蓝光有反应。蓝光激活 phyA 和 phyB 会抑制 SPA1 的活性。

3.以RNA作为介导的三杂交系统

参考文献：Hepatitis delta virus interacts with splicing factor SF3B155 and alters pre-mRNA splicing of cell cycle control genes

乙型肝炎病毒（HDV）是导致最严重的人类病毒性肝炎的病原体。HDV 基因组由单链环状 RNA 分子组成，只编码一种蛋白质，即 delta 抗原。鉴于其简单性，HDV 必须利用多种宿主细胞蛋白来完成其生命周期过程，包括转录、复制、转录后和翻译后修饰。因此，鉴定 HDV 成分与宿主蛋白之间的相互作用在寻找新的治疗靶点方面具有重要意义。作者使用酵母三杂交系统筛选人肝 cDNA 文库，以鉴定与 HDV 基因组 RNA 相互作用的宿主蛋白。其中一个被鉴定的蛋白与剪接因子 SF3B155 相对应，SF3B155 是 U2snRNP 复合物的一个组成部分，对于早期识别人类基因前 mRNA 中的 3′剪接位点至关重要。