样品前处理
样品前处理是植物激素检测过程中重要环节,其结果的好坏不仅决定了后续实验能否继续开展,也决定了能否得到有效的实验数据。 样品前处理一般包括两个步骤,样品提取与富集纯化。首先要选择合适的有机溶剂来提取目标分析物,这个过程要避免许多干扰物质,又要防止内源激素本身被破坏;其次采用各种萃取或层析步骤,使内源激素得到富集纯化,最后再测定其含量。 |
本文对几种常见植物激素富集纯化的方法做简单介绍。常见的富集纯化的方法有固相萃取、固相微萃取、分散液液微萃取等。
固相萃取(SPE):是运用最为广泛的样品纯化除杂方法,主要原理是利用颗粒细小的多孔固相吸附剂将液体样品中的目标分析物选择性的吸附,从而使目标分析物与样品基体和干扰化合物分离,然后再用洗脱液洗脱,以达到分离和富集复溶目的。
优点:该方法操作简单、灵敏度高、选择性好、回收率高。
缺点:除杂能力有限,当植物中含有大量非极性基质时常常会产生很大的基质干扰峰。
固相微萃取(SPME):是一种微型化的固相萃取方法,以熔融石英光导纤维或其它材料为基体支持物,采取“相似相溶”的机理,在其表面涂渍不同性质的高分子固定相薄层,通过直接或顶空方式,对目标分析物进行提取、富集、进样和解析。然后将富集了目标分析物的纤维直接转移到仪器(GC或HPLC)中,通过一定的方式解吸附(一般是热解吸,或溶剂解吸),然后进行分离分析。
优点:萃取同时可对目标分析物进行富集,绿色环保。
缺点:样品回收率过低,对于微量存在于植物中的激素需要大量的植物样。
分散液相微萃取(DLLME):是一种迅速发展的分离技术,该技术是将合适的分散剂和萃取剂通过微量进样器快速注入样品溶液中,在分散剂的作用下,萃取溶剂以微滴形式均匀分散在溶液中形成乳浊液,样品溶液中的目标分析物被萃取到萃取剂微滴中,通过离心分离,在分散在溶液中的萃取剂沉积到试管底部,使用微量进行器移取沉积注入仪器进行分析检测。
优点:操作简单快速,试样消耗低、富集能力强。
缺点:分散剂和萃取剂选择麻烦。
以上方法仅供参考,具体是哪种激素要选用什么样的前处理方法还要依据激素本身的性质而定。随着色谱与质谱技术的发展,相信植物样品前处理会越来越简单。
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