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原核蛋白表达实验案例--pSumo-Mut质粒+Arctic Express宿主菌低温表达体系
钟鼎生物建立了完善的表达鉴定体系和纯化系统，经验丰富的实验技术人员利用低温诱导体系，成功表达了大量重组蛋白，解决了客户的难题。
我们具备丰富的蛋白表达设计经验及实验操作技巧，承诺客户不成功不收费。在获得重组蛋白产品的同时，我们也会提供相应的原始数据和原始图片，我们的客户可以直接使用钟鼎生物提供的实验数据和图片用于论文撰写和发表，不需要再额外花费精力重复实验。另一方面，我们所有的实验数据真实可信，我们提供原始的表达菌株和克隆质粒，客户可以依据我们的实验报告重复我们的实验结果。
pSumo-Mut质粒+Arctic Express宿主菌低温表达体系
| 实验描述 | |||
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利用基因合成、cDNA克隆、反转录等方法，获得目的基因，将目的基因亚克隆至表达载体pSumo-Mut，目的基因在N端融合Sumo标签蛋白，通过测序和酶切验证，确证获得亚克隆正确的表达质粒。 纯化后的蛋白经过Sumo蛋白酶酶切，蛋白N端将会彻底裸露，不留任何氨基酸残基，酶切后的混合物经Ni柱亲和纯化，可以去除融合蛋白、Sumo标签蛋白和Sumo蛋白酶，剩余的蛋白即为酶切后目的蛋白。 |
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| 测序验证 | |||
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| 序列比对 | |||
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| 重组质粒酶切 | |||
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Marker：250,500,750,1000,1500,2000,3000,5000 基因名称：XXXX 克隆编号：G1XXX-1 酶切鉴定：BamHI/HindIII OD260/OD280： 1.85 |
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| 蛋白表达分析鉴定（11度低温诱导体系） | |||
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蛋白诱导表达鉴定 |
泳道M：蛋白marker 泳道1：诱导前 泳道2：诱导后全菌（克隆子1） 泳道3：诱导后全菌（克隆子2） 泳道4：诱导后沉淀 泳道5：诱导后上清 |
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| 重组蛋白亲和纯化（Ni亲和树脂一步亲和纯化） | |||
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蛋白Ni-IDA柱亲和纯化 |
泳道M：蛋白Marker 泳道1：诱导后上清 泳道2：流出液 泳道3：洗脱液 |
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| 纯化后蛋白Sumo蛋白酶酶切 | |||
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蛋白Sumo蛋白酶酶切 |
泳道M：蛋白Marker 泳道1：纯化后融合蛋白 泳道2：2ug融合蛋白/2U sumo蛋白酶切 泳道3：2ug融合蛋白/1U sumo蛋白酶切 泳道4：2ug融合蛋白/0.5U sumo蛋白酶切 |
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| Sumo蛋白酶酶切后第二次亲和纯化 | |||
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Sumo蛋白酶酶切后第二次亲和纯化 |
泳道M：蛋白Marker 泳道1：融合蛋白酶切后混合物 泳道2：流出液 泳道3：洗脱液
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| 备注：上述实验图片是钟鼎生物技术有限公司原核蛋白表达实验的标准交付图片，具体的订单双方协商确认。 | |||
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