原核蛋白表达实验案例--pCznl质粒+Arctic Express宿主菌低温表达体系

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pCzn1质粒+Arctic Express宿主菌低温表达体系

实验描述
利用基因合成、cDNA克隆、反转录等方法，获得目的基因，将目的基因亚克隆至表达载体pCzn1，目的基因在N端融合His标签蛋白，通过测序和酶切验证，确证获得亚克隆正确的表达质粒。     利用构建好的表达质粒，转化Arctic Express宿主菌， 在11度低温IPTG诱导条件下，SDS-PAGE检测目标蛋白表达情况，确认蛋白分布在上清或是沉淀中。     如果目标蛋白产物分布与上清中，通过Ni柱亲和纯化， 获得目的蛋白；如果目标蛋白分布于沉淀中，则通过包涵体梯度洗脱后，重溶获得目标蛋白，必要的话，重溶蛋白在进一步通过亲和纯化提高纯度。
测序验证
序列比对
重组质粒酶切
		Marker：250,500,750,1000,1500,2000,3000,5000 基因名称：XXXX 克隆编号：G1XXX-1 酶切鉴定：BamHI/HindIII OD260/OD280： 1.85
蛋白表达分析鉴定（11度低温诱导体系）
	蛋白诱导表达鉴定	泳道M：蛋白marker 泳道1：诱导前 泳道2：诱导后全菌（克隆子1） 泳道3：诱导后全菌（克隆子2） 泳道4：诱导后沉淀 泳道5：诱导后上清
重组蛋白亲和纯化（Ni亲和树脂一步亲和纯化）
	蛋白Ni-IDA柱亲和纯化	泳道M：蛋白Marker 泳道1：诱导后上清 泳道2：流出液 泳道3：洗脱液
备注：上述实验图片是钟鼎生物技术有限公司原核蛋白表达实验的标准交付图片，具体的订单双方协商确认。

 

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