本文介绍了蛋白质双向电泳实验中常用的溶液配方，包括水化/上样缓冲液、溴酚蓝储液、胶条平衡液贮存液、10%(v/v)SDS溶液、4x分离胶溶液、聚丙烯酰胺单体贮存液、10%过硫酸铵、电泳缓冲液、琼脂糖封胶液等9种溶液配方，现与大家分享，欢迎收藏

A.水化/上样缓冲液(rehydration/sample lysis buffer)

水化/上样缓冲液（I） 1ml

urea	8M	0.48g
CHAPS	4%	40mg
DTT	50~65mM	7~9.8mg
or TBP	2mM	10µl
40% Bio-Lyte	0.2%(w/v)	5µl
1%溴酚蓝	0.001%	1µl
MilliQ水		650µl

水化上样缓冲液（II）1ml

urea	7M	0.42g
thiurea	2M	0.152g
CHAPS	4%	40mg
DTT	50~65mM	7~9.8mg
or TBP	2mM	10µl
40% Bio-Lyte	0.2%(w/v)	5µl
1%溴酚蓝	0.001%	1µl
MilliQ水		650µl

  1. 水化上样缓冲液（I）中的尿素浓度可以调高到9或者9.8M；用7M Urea和2M Thoiurea溶解蛋白的能力较单用尿素强。

  2. 目前常用的去垢剂为CHAPS，也可用Triton X-100、NP-40等代替。

  3. 可以加蛋白质酶的抑制剂和/核酸酶。

  4. 还原剂可用DTT或TBP，分离碱性蛋白时最好用TBP。

  5. 5溴酚蓝作为指示剂，可以监测上样和聚焦过程，如操作熟练，可以不加。

B．溴酚蓝储液

	Final concentration	Amount
Bromophenol blue	1%	10mg
Tris-base	50mM	6mg
MilliQ H2O		to 1ml

C.胶条平衡液贮存液（SDS equlibration buffer）

(50mM Tris-cl pH8.8, 6M Urea, 30% glycerol, 2% SDS, bromophenol blue, 200ml)

	Final concentration	Amount
1.5M Tris-cl,pH8.8	50mM	6.7ml
Urea (Fw 60.06)	6M	72.07g
Glycerol(87% v/v)	30%(v/v)	69ml
SDS(Fw 288.38)	2%(w/v)	4.0g
1%Bromophenol blue solution	0.002%(w/v)	400μl
		To 200ml

分装后贮存于-20℃；溴酚蓝可以不加；

用之前在加DTT(20mg/ml)或者碘乙酰胺(25mg/ml)

D.10%(v/v)SDS溶液

SDS(Fw 288.38)      10.0g

MilliQ H₂O      To100ml

用0.45微米的滤纸过滤室温保存(高纯试剂一般不用过滤)

E.聚丙烯酰胺单体贮存液（Monomer stock solution）

	Final concentration	Amount
Acrylamide	30%	150g
N,N’-methylenebisacrylamide or PDA	0.8%	4.0g 5.0g
MilliQ H2O		To 500ml

用0.45微米的滤纸过滤(可不过滤), 4℃避光保存

F.4x分离胶溶液(4x Resolving gel buffer, 1.5M Tris-Cl pH8.8)

	Final concentration	Amount
Tris-base(Fw 121.1) MilliQ H2O HCl(Fw 36.46)	1.5M	181.5g 750ml Adjust to pH8.8
MilliQ H2O		To 500ml

用0.45微米的滤纸过滤，4℃保存

G.10%过硫酸铵

	Final concentration	Amount
Ammonium persulphate(APS) MilliQ H2O	10%	1g To 10ml

当加入水时，新鲜的过硫酸铵会发出“咔嚓”声音。如果没有声音，则需要换新的药品。可少量(10ml)配制，分装后4℃保存。

H.电泳缓冲液（TGS electophoresis buffer）

(25mM Tris,192 mM glycine, 0.1%SDS)

Final concentration		Amount
Tris base	25 mM	15.1g    7.55g
Glycine	192mM	72.1g    36.05g
SDS	0.1%(w/v)	5.0g    2.5g
MilliQ H2O		To 5000ml To 2500ml

该溶液的pH值不需调整，可直接在大试剂瓶中配制溶液，室温保存。

I.琼脂糖封胶液（Agrose sealing solution）

	Final concentration	Amount
TGS electophoresis buffer Agrose (NA or M) 1% Bromophenol blue	--- 0.5% 0.002%(w/v)	50ml 0.25g 100μl

可在锥形瓶配制，微波炉加热熔化。小份分装，室温保存。

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