磷酸化是最常见的蛋白翻译后修饰之一，简单来说，就是在蛋白质或其他分子上添加一个磷酸基团（PO4）的过程。这个看似简单的操作，却能够短时间改变蛋白质的性质和功能。想象一下，一个原本默默无闻的蛋白质，在经过磷酸化之后，摇身一变成为调控细胞生长、分裂、代谢等关键过程的指挥官。
我们复习一下磷酸化的概念，蛋白质的磷酸化是指由蛋白激酶（protein kinase, PK）催化的把 ATP 或 GTP γ 位的磷酸基转移到底物蛋白质的氨基酸残基上的过程。其逆转过程是由蛋白磷酸酶（protein phosphatase, PPase）催化的，称为蛋白质的脱磷酸化（去磷酸化）。
(1)Western Blot（WB）
原理：Western Blot是定性检测蛋白磷酸化水平的金标准,且大部分实验室具备开展这项实验的条件。它利用SDS-PAGE将总蛋白按照不同的分子量大小进行分离，然后将胶上的蛋白质转移到膜上，再利用特异性磷酸化抗体检测。
特点：
灵敏度高：许多磷酸化抗体尤其是Tyr磷酸化抗体检测灵敏度高。
特异性好：可以识别特定的磷酸化位点，但特异性磷酸化抗体难以制备，导致许多特异性位点的磷酸化检测受限。
局限性：市面上可能没有成品的磷酸化抗体，定制的话又费时费力。
(2)质谱（MS）
原理：先通过SDS-PAGE或者2D-PAGE胶等分离目标蛋白，切下目标蛋白，并用蛋白酶消化以产生肽段混合物，利用亲和纯化技术富集磷蛋白和磷酸肽，LC-MS/MS检测分析蛋白序列和相应位点的磷酸化修饰。
特点：
全面评估：适用于复杂的生物样品中蛋白质磷酸化的全面评估（磷酸化蛋白质组学）。
高灵敏度：能够检测低丰度的磷酸化蛋白。
高分辨率：可以识别新的磷酸化事件和蛋白质亚型。
| 服务流程 | 交付数据或材料 | 周期 | 价格 |
| 步骤一、原核蛋白表达（蛋白底物） | 询价 | ||
| 1、表达质粒构建 2、原核蛋白表达及纯化 |
1、质粒及克隆菌株 2、蛋白底物（该服务不交付纯化后蛋白） 3、实验报告 |
2~3周 周期依据基因长度调整 |
|
| 步骤二、体外磷酸化 | |||
| 3、构建体外磷酸化反应体系 4、sds-page检测 |
4、实验报告 | 1-2周 | |
| 步骤三、磷酸化检测 | |||
| 5、磷酸化抗体WB检测 | 5、实验报告 （最终的WB图片，可以依据文章要求，自定义泳道排布） | 1~2周 | |
文献一：PKCβII phosphorylates ACSL4 to amplify lipid peroxidation to induce ferroptosis
发表杂志：Nature Cell Biology，2022
影响因子：17.728
文献二：NLRP4E regulates actin cap formation through SRC and CDC42 during oocyte meiosis
发表杂志：Cellular & Molecular Biology Letters
影响因子：9.2
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