感受态细胞制备目前常用的方法有传统的Cacl₂法和电转化法，电转化法比较Cacl₂法具有操作简便，转化效率高的优势，本文将会介绍电转化感受态细胞的原理，实验流程与注意事项。

感受态细胞

电转化感受态细胞实验原理

  转化是指质粒DNA或以它为载体构建的重组DNA导入细菌细胞，并使其生物学特性发生可遗传的变化的过程,利用理化方法诱导细胞，使其处于最适摄取和容纳外来DNA的生理状态。电转化法是利用瞬间高压在细胞上打孔，因而需用冰冷的超纯水多次洗涤处于对树生长前期的细胞，以使细胞悬浮液中应含有尽量少的导电离子。

电转化感受态细胞实验流程

1.划单菌落：倒一个普通的无抗性的LA培养皿，利用感受态菌株，划单菌落，37℃培养约15hrs（推荐时间：第一天8：00am-11：00pm）。

2.接菌：用20ml的半盐LB培养基接菌，摇菌约11hrs（推荐时间：第一天11：pm-第二天10：00am）。

3.扩大培养：将菌液接入200ml/瓶的半盐LB培养基中，每瓶2ml（1%体积比），扩大培养细菌约3hr（第二天11：00am-2：30pm），根据不同的感受态菌株，从2.5hr起开始吸1ml菌液测OD值，当OD600值为0.4-0.6之间时，细菌处于指数生长前期。将摇好的菌液放在冰上预冷10min以上（半小时），并不间断摇匀菌液（期间摇晃数次是菌体温度均匀）。以下所有操作均在冰上进行

4.搜集菌体：离心机4度预冷。将预冷的菌液倒入4个500ml离心管中，利用天平两两配平，4度5000rpm离心12min收集菌体，弃去上清，用灭菌吸水纸擦干瓶口。

5.双蒸水清洗1次：先加入5ml左右的预冷双蒸水，用移液器上下吸动将菌体捶打均匀，并将4瓶菌体两两合并成为2瓶。每瓶倒入灭菌双蒸水约400ml，利用天平配平，剧烈震荡数次以保证混匀，4度4000rpm离心12min收集菌体，弃上清，注意勿将菌体倒出，并用灭菌吸水纸擦干瓶口。

6.10%甘油清洗两次：重复以上操作，利用预冷的10%的甘油代替灭菌双蒸水水清洗两次，并且将两瓶菌体合并成为一瓶，利用废弃液体配平离心。

7.分装：视最后的菌体的体积加入适量10%甘油（清洗过程中菌体损失会导致菌体较少则少加甘油；最后一次离心后弃上清时残留的液体过多则少加或不加；正常情况下推荐加10%甘油2.5ml）。利用移液器将菌体上下吸动吹打均匀，将菌液转移到1.5ml或2ml的离心管（冰上）。并分装至500ul离心管中，30ul/管，放入液氮中冷冻后，于-80度冰箱保存。

电转化感受态细胞注意事项

1.所有用到物品均用双蒸水洗涤，配置，并灭菌烘干，在使用之前-20度预冷

2.划好的单菌落立即使用，勿放入冰箱储存，以免影响细菌活力。

3.在摇好的菌液放在冰上预冷时需不时摇动菌液。

4.收集菌体之后的所有操作均在冰上进行。

5.弃去上清时，应缓慢操作，注意不要将菌体倒出。

 

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