转染试剂

    转染(transfection)指真核细胞由于外源DNA掺入而获得新的遗传标志的过程。DNA转染技术的发展对现代分子生物学产生了巨大的影响。基因转染技术不仅是研究转基因和基因表达的重要工具，而且是目前基因治疗的关键步骤。理想的基因转染试剂应该具有如下特点:高效转染;安全;低细胞毒性;方法简单;省时、经济。

    目前, 将外源DNA导入哺乳动物细胞的方法大致可分为两大类，即生物方法和物理化学方法。物理化学方法中常用的有磷酸钙法、显微注射、电穿孔、脂质体介导的转染，以及最近出现的以高分子聚合物为载体的基因传递技术。生物方法则主要是以病毒作为载体,通过病毒感染的方式将外源DNA 导入到细胞中, 其中以逆转录病毒及腺病毒转染系统最为常用。

    其中病毒载体的特点是整和效率高, 可使外源基因在宿主细胞中长期表达，缺点是存在潜在的安全危险性。电穿孔法及显微注射法的特点是转染率较高，缺点是需要昂贵的仪器，前者对细胞的损伤较大，后者在导入DNA时需要一个细胞一个细胞地注射，不适合大量细胞研究的需要。

siRN转染试剂

    CodeBreaker siRNA转染试剂是Promega的专利配方产品，专门为有效转染siRNA而优化设计。这一试剂能有效促进siRNA转染哺乳动物细胞，促进基因乙默，而且毒性小，细胞死亡率低，比如转染CHO与HeLa细胞，使用CodeBrealker基因元默率达到80% 或更多，比起同类产品毒性小50%以上。这一产品操作简使，买来后即可使用，不用溶解。将CodeBreaker转染试剂与合适的siRNA二聚物混合后孵育几分钟，然后加到培养细胞即可。而且转染可在完全生长培养基中进行，不需要更换培养基或再加血清，简化了操纵步骤。CodeBreaker试剂适用的细胞HeLa、HEK293、293T、CHO和3T3细胞等。价格1800,0.4ml,以24孔板为例，按照推荐剂量可以可以做200次，6孔板大约可用40次左右。Day One细胞铺板(in complete growth medium).Day TWO

1.将CodeBreakerl Reagent加到无血清培养基中，混合均匀，室温孵育15一20分钟。
2.制成复合物: 加入siRNA到第一步中，轻微混合。室温孵育15一20分钟。
3.然后与细胞混合，37°C培育24-72 小时，

DNA转染试剂

    Transfast是一种特殊的脂质体转染试剂，由阳鸟子月类(+)-N,N[bis(2-hydroxyethy1)]-N-methy1-N-[2,3-di(tetradecanoyloxy)propyl]和It1性脂类DOPE(用于加强转染能力)且成。TransFast试剂是干脂膜，一旦水化后就形成多层脂质体，因此也就具有更多优势，尤其表现在可以传递多种生物大分子一一小的从寡聚核苷酸，到质 粒DNA 或者RNA，大到酵母人工染色体，都可用TransFast 转染试剂传递进细胞(包括原代细胞)，而且脂质体可以用于体外转染的同时还可以用于体内转染。迄今为止，已经证明TransFast转染试剂在转NIH3T3，CHO，293，K562，PC12，Jurkat 和昆虫Sf9 时特别好。Transfast一个包装是1.2mg(0.4mgx3)1800左右，每个管是干脂膜，用前一天要先用无核酸酶污染的水溶解后在负20°C冻存过夜(可以反复冻融10次而不影响转染效率) ;用的时候是要用无血清培养基稀释DNA，加近量融化混匀的转染试剂，去掉培养皿中的培养基后加入转染试剂一DNA复合物，温育1小时后补加完全培养基。如果对无血清非常敏感的细胞可能就不适合。

    fxTransFast!吉构类似的脂质体转染试剂，不同处也是Tfx最大的特点就是所有的Tfx试剂含有相同浓度的阳离子脂成分，但其中融合脂类的DOPE的摩尔比例不同，故Ifx可分为Tfx-10、Tfx-20和Tfx-50.三种。这样就可以根据自己的需要选择适用的试剂。Ifx 可在l清存在下转染细胞，这有利于转染.代细胞，因为原代细胞在没有血清存在时可能会失去否性。因此使用Tfx 转染细胞需要的时间少，大多细胞系只需1个小时。Tfxo转染的细胞较多。一个包装的Tfx包含有Ifx-10、Tfx-20 和Tfx-50，可以配合不同的细胞使用。

    Transfectam是一种用于转染真核细胞的阳离子脂质体，这种脂质是由dioctadecylamidoglycyspermine( DOGS)复合而成脂多胺结构。其中的精胺基团(spermine) 通过一个肽键共价结合于脂质部分，这样spermine头部的强正电荷使整个结构高度亲和于带负电的DNA 分子，而脂质结构则包裹住整个分子，使之便于定位在细胞膜上。Transfectam试剂可以有效转染广泛的真核细胞。目前经用于进行了稳定和瞬时的转染，这些转染既包括建立的细胞系，也包括原代细胞。除了用于DNA转染，Transfectam也可用于RNA转染和体内应用。

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