用异硫氰酸苯酯测定肽链的N末端氨基酸的PTH法，又称为Edman降解法（异硫氰酸苯酯法）。Edman降解法的基本原理是异硫氰酸苯酯（PITC）能在温和条件下与含有自由氨基的多肽或蛋白质发生偶联反应，生成的苯氨基硫甲酰衍生物经过环化，从肽链上断裂下来，然后转变为PTH-氨基酸。利用PTH-氨基酸在紫外光下有强吸收，可以用色谱进行鉴定。

Edman降解法包括以下步骤

① 偶联反应 碱性条件下、在氮气中，异硫氰酸苯酯与N末端的氨基反应形成苯氨基硫甲酰肽(PTC-肽)的衍生物。

② 洗涤 除去过量的PITC和缓冲液后的样品被彻底干燥。

③ 裂解反应 在无水酸的作用下，PTC-肽发生特异性裂解，产生游离的初始N末端氨基酸的噻唑啉酮和丢失了原N末端残基的变短的多肽。

④ 萃取 将噻唑啉酮萃取至疏水有机溶剂中，与变短的多肽分离。

⑤ 转化反应 在稀酸作用下，使不稳定的噻唑啉酮转换为稳定的乙内酰苯硫脲氨基酸 （PTH-氨基酸）。

⑥ 鉴定 用TLC或 HPLC分析，与标准图谱比较鉴定PTH-氨基酸。

在Edman降解法中将偶联、洗涤、裂解、萃取和转化这个过程称为一个“循环”，在手工测定中大约需要２ｈ。基本 Ｅｄｍａｎ降解法最大的优点是：在切下Ｎ 末端氨基酸残基时，不会发生整个肽链的全水解，切短的肽再经过下一个循环的 Ｅｄｍａｎ降解步骤，产生下一个残基的 ＰＴＨ-衍生物。因此，Ｅｄｍａｎ降解法后来用于测定从 Ｎ 端开始的氨基酸排列顺序，并在此基础上于１９６７年设计出第一台自动测序仪。目前所有测定 Ｎ 端序列的方法都是以 Ｅｄｍａｎ降解反应为基础发 展起来的改良方法。

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