一、软件预测法

亚细胞定位预测的软件有很多，我们推荐使用使用戈登生命科学研究所（Gordon Life Science Institute）”的创始人周国华教授在Nature Science上发表的预测软件Cell-PLoc。

Cell-PLoc: A package of web-servers for predicting subcellular localization of proteins in various organisms.

软件链接： http://www.csbio.sjtu.edu.cn/bioinf/Cell-PLoc-2/

二、实验验证

通过对目的蛋白的标记，例如融合绿色荧光蛋白GFP，使用扫描共聚焦显微镜激发荧光，从而对蛋白的表达分布予以确认。依据对亚细胞分布的精确度不同，亚细胞定位的实验设计也分成简化型亚细胞定位分析和内参型（细胞膜，细胞核，内质网marker）共定位分析。

对于植物蛋白的亚细胞定位分析，主要通过构建融合荧光蛋白的过表达质粒，转化烟草和原生质体瞬时表达体系确定其定位及共定位情况。

钟鼎生物可以为科学家提供性价比高、专业便捷的亚细胞定位技术服务，将构建好的质粒转化到农杆菌菌株LBA4404中，通过农杆菌介导法浸染烟草，以pCAMBIA1302空载为阳性对照，使用蔡司激光扫描共聚焦显微镜 (Zeiss, LSM510 Meta, Carl Zeiss AG)进行观察和拍照。

植物蛋白亚细胞定位服务项目
服务项目	服务描述	备注	周期
植物过表达载体构建	将目的基因亚克隆至过表达质粒	可转化农杆菌	2-3周
亚细胞定位	浸染烟草，激光共聚焦扫描	含对照样本	1-2周

三、实验结果

叶绿体荧光信号说明：
叶绿体荧光信号激发波长：640nm，发射波长：675nm
GFP信号说明：
绿色荧光蛋白GFP： 激发光488nm，发射光510nm
激光共聚焦型号：Nikon C2-ER

技术交流

客户发表文章：

1、A Basic Helix-Loop-Helix Transcription Factor, PtrbHLH, of Poncirus trifoliata Confers Cold Tolerance and Modulates Peroxidase-Mediated Scavenging of Hydrogen Peroxide1[C][W]

2、A Novel NAC Transcription Factor, PbeNAC1, of Pyrus betulifolia Confers Cold and Drought Tolerance via Interacting with PbeDREBs and Activating the Expression of Stress-Responsive Genes

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