植物蛋白亚细胞定位

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植物蛋白亚细胞定位

蛋白分布在不同的细胞的不同部位,对蛋白的亚细胞定位分析可以有助于蛋白功能研究的初步判断,目前存在两种方法,其一为软件预测,其二通过实验验证。

一、软件预测法
亚细胞定位预测的软件有很多,我们推荐使用使用戈登生命科学研究所(Gordon Life Science Institute)”的创始人周国华教授在Nature Science上发表的预测软件Cell-PLoc。

亚细胞结构图
Cell-PLoc: A package of web-servers for predicting subcellular localization of proteins in various organisms.

软件链接:http://www.csbio.sjtu.edu.cn/bioinf/Cell-PLoc-2/

二、实验验证
通过对目的蛋白的标记,例如融合绿色荧光蛋白GFP,使用扫描共聚焦显微镜激发荧光,从而对蛋白的表达分布予以确认。依据对亚细胞分布的精确度不同,亚细胞定位的实验设计也分成简化型亚细胞定位分析和内参型共定位分析。
对于植物蛋白的亚细胞定位分析,主要通过构建融合荧光蛋白的过表达质粒,转化烟草和原生质体瞬时表达体系确定其定位及共定位情况。

亚细胞结构图

钟鼎生物可以为科学家提供便捷的亚细胞定位技术服务,将构建好的质粒转化到农杆菌菌株LBA4404中,通过农杆菌介导法浸染烟草,以pCAMBIA1302空载为阳性对照,使用蔡司激光扫描共聚焦显微镜 (Zeiss, LSM510 Meta, Carl Zeiss AG)进行观察和拍照。

植物蛋白亚细胞定位服务项目
服务项目 服务描述 备注 周期
植物过表达载体构建 将目的基因亚克隆至过表达质粒 可转化农杆菌 2-3周
亚细胞定位 浸染烟草,激光共聚焦扫描 含对照样本 1-2周