植物过表达、干扰表达载体构建

  ◎当前位置:首页>>技术服务>>植物基因工程类技术服务>>植物过表达、干扰表达载体构建

植物过表达、干扰表达载体构建

植物基因工程研究中,反向植物遗传学是最经典的研究思路,通常从一个基因入手,通过一元或多元的过表达、干扰表达等手段调节一个或多个基因的表达水平变化,观察表型变化,从而对相关基因进行一系列的分子机制研究。

一、过表达载体构建

  通过人工基因合成或直接从植物基因组中获取目的基因的片段,亚克隆至带有启动子、复制子以及抗性标记和筛选基因的质粒上,以实现目的基因的过表达,从而对目的基因的生物学功能进行研究。
  钟鼎目前主要使用的过表达质粒为pCAMBIA系列,包含一元以及双元表达载体系列,基于花椰菜花叶病毒35S启动子(promoter of Cauliflower mosaicvirus 35S,CaMV35S),载体上携带卡纳抗性和潮霉素Hygromycin筛选标记,使用基于根瘤土壤杆菌的Ti质粒的T-DNA系统,将目的基因整合至植物基因组,从而实现目的基因的过表达。

载体图谱信息如下:

载体图谱

二、干扰载体构建

  在基因功能研究中,相对于目的基因的过表达的操作,就是我们经常进行的干扰表达,在植物体系中,钟鼎目前主要使用基于Rice Intron产生ShRNA的pTCK303系列载体(本公司仅承担科研项目,质粒的所有权及只是产权归对应的商业化公司)。
  该体系中也具有花椰菜花叶病毒35S启动子(promoter of Cauliflower mosaicvirus 35S,CaMV35S),载体上携带卡纳抗性和潮霉素Hygromycin筛选标记,同时还拥有GUS基因,我们可以针对目的基因序列,构建互补的基因片段,在体内形成shRNA结构,从而实现对目的基因表达的抑制效应。

载体图谱信息如下:

载体图谱

钟鼎载体构建特色:
1、依据科研的目的,提供专业的构建设计方案。例如GFP的融合位点,GUS基因的保留等具体建议。
2、除了交付含有质粒的大肠杆菌外,我们可额外转化EHA105 GV3101 Lba4404等农杆菌,并对农杆菌进行PCR鉴定,以确保目的基因转化成功。
3、仅需提供序列,无需提供其他外材料,钟鼎一站式解决。

植物过表达、干扰表达载体构建服务项目
服务项目 服务描述 备注 周期
植物过表达载体构建 将目的基因亚克隆至过表达质粒 可转化农杆菌 2-3周
植物干扰表达载体构建 将目的基因片段双向克隆至干扰载体 可转化农杆菌 3-4周