植物过表达、干扰表达载体构建

植物基因工程研究中，反向植物遗传学是最经典的研究思路，通常从一个基因入手，通过一元或多元的过表达、干扰表达等手段调节一个或多个基因的表达水平变化，观察表型变化，从而对相关基因进行一系列的分子机制研究。

一、过表达载体构建

　　通过人工基因合成或直接从植物基因组中获取目的基因的片段，亚克隆至带有启动子、复制子以及抗性标记和筛选基因的质粒上，以实现目的基因的过表达，从而对目的基因的生物学功能进行研究。
　　钟鼎目前主要使用的过表达质粒为pCAMBIA系列，包含一元以及双元表达载体系列，基于花椰菜花叶病毒35S启动子(promoter of Cauliflower mosaicvirus 35S,CaMV35S)，载体上携带卡纳抗性和潮霉素Hygromycin筛选标记，使用基于根瘤土壤杆菌的Ti质粒的T-DNA系统，将目的基因整合至植物基因组，从而实现目的基因的过表达。

载体图谱信息如下:

二、干扰载体构建

　　在基因功能研究中，相对于目的基因的过表达的操作，就是我们经常进行的干扰表达，在植物体系中，钟鼎目前主要使用基于Rice Intron产生ShRNA的pTCK303系列载体（本公司仅承担科研项目，质粒的所有权及只是产权归对应的商业化公司）。
　　该体系中也具有花椰菜花叶病毒35S启动子(promoter of Cauliflower mosaicvirus 35S,CaMV35S)，载体上携带卡纳抗性和潮霉素Hygromycin筛选标记，同时还拥有GUS基因，我们可以针对目的基因序列，构建互补的基因片段，在体内形成shRNA结构，从而实现对目的基因表达的抑制效应。

载体图谱信息如下:

钟鼎载体构建特色：
1、依据科研的目的，提供专业的构建设计方案。例如GFP的融合位点，GUS基因的保留等具体建议。
2、除了交付含有质粒的大肠杆菌外，我们可额外转化EHA105 GV3101 Lba4404等农杆菌，并对农杆菌进行PCR鉴定，以确保目的基因转化成功。
3、仅需提供序列，无需提供其他外材料，钟鼎一站式解决。

植物过表达、干扰表达载体构建服务项目
服务项目	服务描述	备注	周期
植物过表达载体构建	将目的基因亚克隆至过表达质粒	可转化农杆菌	2-3周
植物干扰表达载体构建	将目的基因片段双向克隆至干扰载体	可转化农杆菌	3-4周

 

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