钟鼎生物NBC细胞系说明书

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细胞

钟鼎生物NBC细胞系简介:

    钟鼎生物NBC细胞系采用本生烟草(Nicotiana benthamiana)为材料,经无菌培养诱导愈伤组织产生,悬浮驯化培养20代以上得到的稳定细胞系。具有生长迅速,体系稳定等优点。相对于传统植物植株材料,其分散性好和易于操作等优势,可明显降低植物材料取材不均匀带来的实验误差,增加实验说服力。

    本材料包括植物悬浮细胞一管,体系为40mL,初始细胞沉降容积占比在10mL/40mL以上,冷藏运输。附赠培养基40mL,可用于一次传代。

使用说明

1.培养条件:
    在无菌避光条件下,采用100mL广口培养瓶透气震荡培养。其培养条件如下:

培养条件 适用范围 最适条件
摇床转速 100~130 rpm 120 rpm
温度 24~27℃ 26℃
沉降容积 20%~80% 40%
培养总体积 30~50mL 40 mL
传代周期 5~10 天 7天

培养说明:
    1)沉降容积占比测定:在无菌条件下将培养体系倒入50mL离心管,竖直放置10~15min,其中“沉降部分的体积占总体积”即为沉降容积占比。
    2)收到细胞后,在无菌条件下,轻轻摇晃重悬,转移至100mL广口三角瓶中,以无菌透气膜封口,在26℃避光条件下120rpm振荡培养。培养4~7天颜色保持浅黄色,且沉降容积有明显增加则说明细胞状态良好。
    3)NBC细胞每5~7天传代一次。传代时在无菌条件下加入40mL培养基后摇匀,分装两瓶。细胞沉降容积多余30mL/40mL时,可加入80mL培养基,摇匀分三瓶。
    4)显微镜下NBC细胞为寡细胞团形式的卵形细胞,有少量畸形细胞及死细胞属正常现象。
    5)生长良好的细胞状态为浅黄色、半透明、细颗粒状,无褐化现象。当细胞团颜色过浅说明细胞状态不佳,可沉降细胞后吸除上部培养基,更换新培养基,并调整沉降容积在25%,培养至细胞状态恢复即可。
    6)细胞传代五代左右,细胞团会明显增大,不影响其生长,但分散性会变差。可用40目无菌筛子筛除大细胞团,调整沉降容积至20%后继续培养。
    7)细胞传代后会有三天左右的生长停滞期,其他调整培养基的操作也会导致细胞生长停滞期。处于停滞期的细胞代谢活性及抗逆性均不如对数生长期。细胞沉降容积低于15%时会导致细胞生长缓慢。

2.材料应用

    NBC可应用于植物细胞学水平研究,代谢途径研究,植物胁迫因子作用研究,转基因,外源基因瞬时表达,植物-微生物互作等研究。

    1)处于生长停滞期的细胞不利于实验,特别是代谢及外源基因表达。
    2)NBC细胞在抗逆性方面与本生烟草植株有差异性。与哺乳及昆虫细胞悬浮培养相比,更能耐受微生物侵染。
    3)NBC细胞可与微生物共培养,用于其相互作用关系研究。共培养期间二者属于竞争抑制的关系,共培养周期取决于微生物生长速度及初始生物量比。
    4)NBC细胞可用于烟草植株再生,也可用琼脂半固体培养基培养。滤除液体培养基后转移至相应的琼脂半固体再分化培养基上培养即可。NBC细胞适应性较好,如无法适应新培养环境,可联系本公司定制特殊培养基。

    5)NBC细胞可用作转基因材料,对各种微生物及抗生素耐受性均较好。

ZN01培养基

    ZN01培养基为钟鼎生物针对NBC细胞开发的化学成分明确的培养基,批次间稳定,适用于本公司NBC细胞的生长。ZN01培养基营养成分齐全,已灭菌处理,直接使用即可。

    培养基储存条件:避光冷藏保存,培养基中有少量沉淀物属于正常情况。

 


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