一、植物生长发育

细胞信号转导
品质代谢
a 色泽（MYB转录因子调控途径）
b 成熟（ERF转录因子调控途径）

    利用酵母单杂交筛选拟南芥 AtSTK基因表达调控蛋白的研究

    研究背景：

    1、拟南芥丝氨酸/苏氨酸蛋白激酶基因 AtSTK 的过量表达可提高拟南芥的耐盐性。

    2、MAPK 级联途径是由一类保守的丝氨酸 / 苏氨酸蛋白激酶参与的信号传导途径，此类蛋白激酶在多种信号传递中起着重要的作用。在植物体中 MAPK 信号途径参与干旱、高盐、低温等多种胁迫反应的信号传递。

文章思路
    1、cDNA文库构建与酵母单杂交检测得到了4个可能参与AtSTK基因表达调控的拟南芥基因。
    2、BLAST比对后分析表明,其中一个基因含有WRKY转录因子保守结构域，为WRKY类转录因子的一员。
    3、通过过表达转基因植株RT-PCR检测，发现AtSTK基因的过表达参与MAPK信号传导途径。
    4、推测AtSTK基因很可能通过MAPK信号传导通路中的该基因编码的WRKY蛋白质调控表达量，从而影响到拟南芥的抗逆特性。

二、抗逆机制研究

A 生物胁迫

    对植物生存与发育不利的的各种生物因素的总称。 通常是由于感染和竞争所引起的，如病害、虫害、杂草危害等。

B 非生物胁迫

    干旱、低温、盐碱

    酵母单杂交体系分离水稻中一个新的与W盒相关的转录因子
    研究背景:
    W盒存在很多病原菌诱导的基因启动子中,是参与病原菌应答的一类主要顺式作用元件。
    利用酵母单杂交体系，我们从水稻的cDNA库中分离到一个能与玉米PRms基因启动子中w盒结合的转录因子RWRKY。
    BLAST分析证实该基因为WRKY家族中的新成员。

文章思路

    11、研究通过酵母单杂交体系从水稻幼苗cDNA库中分离到了与PRms基因中真菌激发子元件互作转录因子基因,该基因编码的蛋白质中含有植物特有转录因子WRKY蛋白的DNA结合区。
    2、利用BLAsT软件分析表明,该蛋白存在一个由大约60个氨基酸组成的保守区域,因此属于wRKY蛋白家族第二组成员。
    3、水杨酸诱导实验验证。叶片VS根，不同时间段。以分离到片段为探针,通过Northern杂交分析了该基因转录物在受到水杨酸诱导后的积累情况. Northern分析表明结果表明,该基因在水稻叶片中受水杨酸瞬间诱导，说明该蛋白可能参与病原物侵染后植物的诱导抗病机制。

三、蛋白组学及功能基因组学研究

发现新蛋白质以及探究蛋白质功能

建立基因组蛋白连锁图

    大规模的酵母双杂交系统在蛋白质相互作用组图谱中的应用
    蛋白质组学是后基因组时代出现的一个新兴的研究领域，它的主要任务是识别鉴定细胞，组织或机体的全部蛋白质，并分析蛋白质的功能及其模式。
    蛋白质-蛋白质之间的相互作用是蛋白质发挥其功能的重要途径之一。通过研究蛋白质组中所有蛋白质之间的相互作用做出蛋白质相互作用对图谱是功能基因组时代许多科学家关注的问题,而大规模的酵母双杂交系统是蛋白质相互作用对图谱的研究中应用较为广泛的策略。

 

四、医药领域（阿尔茨海默病）

    A 研究人类DNA文库（构建cDNA 文库）

    B 筛选药物作用位点

    1 、找出蛋白互作的氨基酸序列

    2 、药物干扰阻断

    线粒体膜蛋白BNIP3引起的细胞凋亡途径的研究（肿瘤与脂肪酸代谢）

    思路背景:

    1、构建膜蛋白酵母双杂交筛选文库一人肝cDNA文库

    2、线粒体膜蛋白BNIP3相互作用蛋白的筛选鉴定 ACAA2

      A Pull一down实验验证

      B CO-IP体内验证

    3、BNIP3和ACAA2共定位在线粒体

    4、ACAA2减弱了BNIP3引发的线粒体功能破坏

    结核杆菌致病机制的初步研究

    思路背景:

    1、构建膜蛋白酵母双杂交筛选文库一人巨噬细胞cDNA文库
    2、筛选与结核杆菌蛋白wag31相互作用的蛋白
      A GST pull一down实验验证wag31与XCL2之间的相互作用
      B 免疫共沉淀实验
    3、结核杆菌蛋白wag31激活了XCL2在巨噬细胞中的表达

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