一、动力学分析中，结合常数 Ka、解离常数 Kd、亲和力常数 KD 分别代表什么？

结合常数 Ka: 代表复合物（RL）的形成速率，在 1M 的 R 和 L 下，每秒产生的复合物数量。
单位为 M^-1S^-1,一般从 10³ 到 10⁷M^-1S^-1。

解离常数 Kd: 反应了复合物的稳定性，每秒钟解离的复合物的百分比。
Kd=0.01S^-1，即为每秒钟有1%的复合物解离，Kd 越大，解离越快。
单位为 S^-1，一般在 10^-2 至 10^-5S^-1。

亲和力常数 KD: 反应了相互作用结合能力的大小，越小亲和力越高，Kd/Ka的比值，是平衡常数的倒数。
单位为 M，检测范围为 mM~pM。

二、SPR 可研究的生物分子范围？

蛋白质、DNA/RNA、 脂类 /脂质体/ 生物膜、多糖、多肽、小分子、全细胞/病毒/微生物

钟鼎目前可以检测的亲和力范围：

① 亲和素-生物素结合: 10^-14M;
② 强的抗原-抗体结合：10^-8 ~10^-10 M;
③ DNA 与蛋白的结合：10^-8 ~10^-10 M;
④ 较弱的抗原-抗体结合：10^-6 ~10^-7 M;
⑤ 蛋白与小分子结合：10^-3 ~10^-6 M。

三、SPR 的样品需要满足什么要求？

样品的均一性	蛋白理化性质	缓存液成分	亚型/标签类型
确保样品充分水溶，样品中没有任何沉淀、颗粒——保持样品处于均一的、不聚集的状态	纯度（>90%），蛋白浓度 >0.2mg/ml ，浓度越高越好； 明确等电点/分子量信息	分析物样品中不能含有甘油、蔗糖、咪唑等高折光的成分； 氨基偶联的配体溶液中不能含有tris、NaN3、甘氨酸等成分； 小分子需要知道有机溶剂信息	如果配体或分析物是抗体，请告知抗体亚型及抗体种类； 如果配体或分析物是蛋白，请告知标签类型

四、相比较 Octet，Biacore 检测具有哪些优势？

	Biacore	Octet
原理	表面等离子共振 Surface Plasmon Resonance(SPR)	生物层干涉 Bio-Layer Interferometry (BLI)
信号读取	折光率	波长位移
温控范围	4-40℃	常温
进样方式	连续流动流体特性，分辨力更胜一筹，但是流路易堵塞，维护成本高	浸入式，维护成本低，但是样本易蒸发
分子量范围	无分子量检测下限	分子量检测下限 150Da
分析时间	1.5-2h/对	20min左右/对
通量	T200: 通量低 ; 8k: 高通量	相对通量较高
样品兼容性	对有机溶剂、折光性物质耐受性差	耐受性较好
分析成本	不可再生的方法做一个蛋白与多个抗体的模式成本占优势	可再生方法成本优势明显
分析上的优势	小分子检测更灵敏、准确	样本量大占优势；表位分析占优势
质控	QC 模块	无
法规收录	美国、日本药典、2020中国药典	2021年美国药典

五、SPR技术具有哪些特点？

（1）实时检测，能动态监测生物分子相互作用的全过程；
（2）无需标记样品，保持了分子活性；
（3）样品需要极少，一般一个表面仅需要 100μg 蛋白；
（4）检测过程方便快捷，灵敏度高；
（5）应用范围广泛；
（6）高质量的分析数据。

六、SPR检测可提供的信息？

（1）有无结合 (Yes or No)；
（2）结合的特异性和选择性 (Specificity)；
（3）两种分子的结合强度——亲和力 (Affinity)；
（4）结合和解离的快慢和复合体的稳定性——动力学 (Kinetics)；
（5）分子结合的温度与热力学特征 (Thermodynamics)；
（6）目标分子活性含量的检测 (Concentration)；
（7）能跟踪监控固定的配体的稳定性。

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