所需试剂:

1.5XCTAB:
15g CTAB粉末( Bio Basic Inc. GB0308BJ011J)	75ml 1M Tris-HCL, pH8.0 (进口分装)
30ml 0.5M EDTA, pH 8.0 (国药)	61.4g NaCl ( 国药集团有限公司，分析纯)
分析纯)定容1L,搅拌子搅拌溶解2小时。
10%CTAB:
100g CTAB粉末	40.95g NaCI
定容化，搅拌子搅拌溶解过夜，使用前65C水浴。
1%CTAB:
CTAB粉末10g	50ml 1M Tris-HCl, pH 8.0
20ml 0.5M EDTA, pH 8.0	定容1L,搅拌子搅拌均匀。
氯仿/异戊醇24: 1 (体积比):	500ml氯仿中加入22ml异戊醇
1M NaCI溶液:	NaCI 58.44g,加双蒸水溶解，定容1L,分装后灭菌。
TE:
5ml 1M Tris-HCl, pH 8.0	1ml 0.5M EDTA, pH 8.0
加双蒸水至500ml,分装后灭菌。

实验步骤

1.取1g生长旺盛的植株叶片，于液氮中迅速研磨成粉;

2.将粉末转移至 10ml 离心管中，加入2ml (枪头需提前划好刻度以免因受热后吸取过量)煮沸的1.5X CTAB (保持高温);

3.65"C温浴 30min;

4.样品排序，加入等体积(通风橱内通过胶头滴管)的氯仿/异戊醇(24: 1)，保证每个离心管不漏液，轻缓颠倒混匀25min, 3000rpm 离心15min;

5.转移(直接倒即可)上清液于另一10ml离心管中(一般2ml左右)，加入1/10体积的10%CTAB (提前65℃温浴)，再加入等体积氯仿/异戊醇(24: 1),轻缓颠倒混匀20min, 3000rpm 离心15min;

6.吸2ml上清(1ml的枪头需剪去大约7mm的枪尖)于离心管，加入5ml1%CTAB,充分混合均匀后，静置10分钟致絮状DNA聚集，30000 rpm离心15min;

7.弃上清，加入1ml1MNaCI溶液和1μlRNase(提前根据所需量配好mixture)，65"C溶解 1d;

8.加入3ml预冷乙醇沉淀DNA;

9.将沉淀转至 1.5ml离心管中，之后用75%的乙醇洗涤沉淀，10000 rpm离心5min;

10.弃上清，晾干后溶于50μl -100μl TE中，溶解至少1周(TE用于长时间保存DNA,若短时间可直接用双蒸水溶解);

11.取1μl 用于0.8%琼脂糖凝胶电泳检测提取的基因组DNA,剩余-20C保存备用。

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