蛋白表达纯化

基因优化

Ⅰ.保持完整的mRNA结构，兼顾5-UTR和3-UTR 对翻译的影响
Ⅱ. tRNA丰度，采用与tRNA丰度呈正相关性的同义密码子，蛋白的翻译和准确性更高
Ⅲ.运用更接近于表达系统的密码子，降低转录和翻译的难度，提高表达效率通过优化，超过85%基因选择的载体中得到表达。

多载体和菌种选择

载体选择 PET 系列，pMAL, pCZN ,pGEX(GST), pSumo
宿主菌的选择 Aritic Express,BL21（DE3）plys系列, Trans B(DE) 3, Rosseta,Origami B系列

纯化方式

His、GST、MBP、离子、分子筛及其他

原核技术服务类型

类型	表达条件	结果	交付形式	备注
无要求蛋白交付	转化AE或者plys，进行37℃，0.4mM IPTG 诱导4hr	转化AE或者plys表达鉴定，如果表达则纯化，不表达则结束或者进行后续方案	纯度不低于85%，浓度不低于0.3mg/ml 溶液或者冻干	接受客户提供质粒和菌种
蛋白交付保证型	进行37℃，0.4mM IPTG 诱导4hr	转化AE如果不表达转化plyss鉴定，如果表达则纯化，不表达则结束或者进行后续方案	纯度不低于85%， 浓度不低于0.3mg/ml溶液或者冻干	建议不接受客户提供的质粒和菌种，如果客户提供，加收鉴定费用
上清蛋白交付保证型	11,20,37三个温度，pczn、pet、trx或者MBP融合载体条件优化，如果融合进行酶切获得蛋白	先尝试低温，根据订单要求，递进式进行条件优化选择	纯度不低于85%，浓度不低于0.5mg/ml溶液或者冻干	建议不接受客户提供的质粒和菌种
表达条件优化	11，20，37三个温度，IPTG 0.1，0.5 1mM优化	确定最优条件	报告	接受客户提供质粒和菌种

 

原核蛋白表达注意事项

1. 对于膜蛋白，激酶，病毒蛋白，受体蛋白，分子量过大（100kd）或者分子量过小（8kd）的蛋白，大肠杆菌表达的成功率比较低，根据客户对蛋白的用途，建议客户采用合适的系统，或者采用融合或者截断表达。
2. 后续蛋白做互作的，建议客户做上清表达套餐，或者采用烟草共表达体系。
3. 对于酶切蛋白，要咨询好融合蛋白是否接受，如果接受，我们会在酶切的同时，会制备足够的融合蛋白。
4. 去内毒素蛋白可达到1EU/ug标准，费用额外加收一定费用。
5. 对于做ELISA筛选的蛋白，建议客户上清表达蛋白。
6. 可分泌表达羊驼抗体，客户提供序列即可，目前我们有成功表达案例。

原核表达优势

1、基因优化系统
2、低温启动子，上清表达效率高
3、自诱导优化体系，可明显可溶性蛋白的表达量
4、分泌表达，可表达小分子抗体
5、快，1-3mg最快5个工作日交付
6、可提供蛋白-抗体一体化服务

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