1、如何避免待检测蛋白的二次污染问题?
问题解答:很多客户抱怨蛋白纯度无法达到要求,检测结果不理想,并且会出现莫名其妙的角蛋白峰。这是典型的实验过程中二次污染,这种二次污染源就是我们的实验习惯。蛋白质谱检测中的角蛋白峰主要在染胶、脱色、切胶和酶解过程中引入的,其来源包括我们的皮肤屑,头皮屑,衣物上的动植物蛋白等,因此在试验关键操作过程中,如切胶一定要身穿实验服,佩戴手套,口罩和发套在通风橱中进行;洗染胶的容器也需要使用70%的酒精清洗,再使用去离子水冲洗,实验过程专心致志,做到快速、准确。
2、可以提供哪几类蛋白样品?
问题解答:待检测的蛋白样品可以是蛋白溶液、蛋白冻干粉或直接切胶的湿胶块。对于Western Blotting,在PVDF膜上的蛋白样品,是无法回收进行试验的。
3、蛋白样品如何保存最适宜?
问题解答:蛋白样品最好不要像平时试验一样,放在缓冲溶液中保存,因为不同的缓冲液体系中的无机盐成份,会严重干扰蛋白检测结果。如切胶后的胶条直接放在EP管中,低温保存即可。
4、蛋白浓度偏低,如何浓缩?
问题解答:可以使用超滤法浓缩,对蛋白性质不会有改变,蛋白种类也不容易丢失,但是损耗比较大,甘油和去垢剂等会堵塞滤膜,影响效果;也可以使用冻干法,对样品进行低温冷冻干燥浓缩;常见的还有沉淀法,该方法容易操作并且方便快捷,但是可能会有部分种类的蛋白无法沉淀导致蛋白种类丢失。
5、提供多少蛋白质才能满足实验要求?
问题解答:正常情况下,使用考马斯亮蓝染色能够看见的点,就有机会鉴定出来,将蛋白质收集后邮寄给钟鼎生物即可,不同的检测项目,对蛋白质的需要量是不同的,但是为了便于我们操作,请提供足量的蛋白,尽量保证浓度大于1mg/ml,蛋白纯度大于90%,在条件允许情况下蛋白质的量越多越好,单项检测最少不得低于5ug。
6、蛋白质鉴定分析实验成功的几率有多高?
问题解答:蛋白质鉴定,其实就是一个检测仪器的一次循环,在仪器正常使用的情况下,成功率的高低我们无法控制,主要取决于提供的蛋白样品的质量和待检测蛋白的本身性质。 例如N-端封闭的蛋白N端测序实验的成功率几乎为零,分子量在20KD~50KD的蛋白成功率就非常高,太小哦或太大的蛋白质成功率都比较低。
7、蛋白样品如何邮寄?
问题解答:蛋白质样品准备完毕后,请先与钟鼎生物技术有限公司的技术支持人员联系,填写样品登记表,对待测样品命名编号,做到样品与登记表记录一一对应,将登记表和蛋白样品一起放入泡沫盒中,同时放置干冰和冰袋,邮寄至我公司,告知我们快递单号,由我们负责跟踪查收。
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