质粒简介

质粒是真核细胞细胞核外或原核生物拟核区外能够进行自主复制的遗传单位，部分细胞器中也存在质粒，如线粒体、叶绿体。现在习惯上用来专指细菌(大肠杆菌）、酵母菌和放线菌等生物中细胞核或拟核中的DNA以外的DNA分子。

发现：

质粒大小约为2-200kb，常见于细菌中。质粒独立于染色体之外进行复制和遗传，依赖于宿主编码的酶和蛋白质来进行复制和转录，一旦离开寄主细胞，则无法繁殖。

质粒载体：

质粒载体是一个独立的复制子。要求载体的分子量小，拷贝数高，有筛选标记，具有酶切位点或多克隆位点。

构建质粒载体的要求：

1. 分子量尽量小（>15kb时转化效率低）
  小质粒优点： ①容易提取；
②较为抵抗机械（超声波）切割；
③多拷贝，给克隆基因提供了剂量效应；
④对内切酶提供多切点的机会大为减少。 2. 了解载体上基因位置/限制酶作用位点
3. 包含可供选择的标记性状（基因）
4. 应有另一个遗传标记基因（抗生素常用）
5. 最大限度地具有MCS的单切点

质粒转化菌株的表型筛选：

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