GST-pull down 技术原理

GST-pull down技术是在GST融合蛋白的基础上发展起来的，GST 能与谷胱甘肽特异性结合，其作为表达标签蛋白，能促进原核表达蛋白的正确折叠及可溶性表达。GST-pull down 主要包括以下 3 部分：

① 用基因重组技术构建带有 GST 标签的原核表达载体；
② 通过原核表达系统表达带有 GST 标签的融合蛋白；
③ 利用 GST 亲和纯化柱进行蛋白纯化，获得高纯度的融合蛋白；再利用 GST 亲和纯化柱进行蛋白间的相互作用检测。

具体原理见图 1

　　　图 1 GST-pull down 的原理

注：

①获得带有 GST 标签的融合蛋白；
②将带有 GST 标签的融合蛋白亲和到谷胱甘肽层析柱上；
③获取可能与融合蛋白发生相互作用的蛋白；
④与融合蛋白发生相互作用的蛋白被亲和到谷胱甘肽层析柱上；
⑤切掉标签，洗脱得到相互作用的蛋白。

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