微滴式数字PCR案例分析（以食品安全为例）

　　采用多重ddPCR，针对牛肉类食品掺假情况检测，将检测牛肉的探针记为FAM，而检测的其他肉类探针标记为HEX。检测样品中若含有牛肉成分，则FAM通道能检测到相应的荧光;反之，则 FAM通道无法检测到荧光。若样品中含有鸡肉、鸭肉或猪肉中任何1种成分，则HEX通道有荧光检出;反之，则没有荧光检出。用已知肉源样本做比较实验，其中Ⅰ反应加牛和鸡的DNA，Ⅱ反应加牛和鸭的DNA，Ⅲ反应加牛和猪的DNA，Ⅳ反应同时加入牛、猪、鸡和鸭的DNA。

　　图1为利用荧光定量PCＲ扩增优化后的多重数字PCＲ体系，分析多重扩增体系的可扩增性。在含有相应DNA模板的扩增体系中，均呈现相应的扩增曲线。当体系中同时含有牛、猪、鸡和鸭的DNA时，因猪、鸡和鸭的探针都是同一荧光标记(HEX)，因此对猪、鸡和鸭的扩增是同一扩增曲线。多重荧光定量PCＲ分析结果表明了多重扩增体系的可行性。

　　图2表明，在FAM通道中，4个反应体系中都扩增出牛肉信号；在HEX通道中，Ⅰ-Ⅳ反应中分别扩增出相应的样品信号。在2个荧光通道中，阳性微滴和阴性微滴区分很明显，后期分析中，满足数字PCＲ的分析要求。

　　二维散点图谱分析结果，如图3所示，从扩增结果看，2个通道中的反应均得到良好扩增，且信号值满足分析要求。

　　根据以上数值，可分析出不同样品的掺假情况。
　　荧光PCR不能区分牛肉制品中是故意掺假还是加工过程中无意的带入，而微滴式数字PCR,从单拷贝数上设计引物，快速、便捷并且具有一定的抗干扰能力。

相关服务