Co-IP实验的4个关键因素

    免疫共沉淀（Co-Immunoprecipitation）是以抗体和抗原之间的专一性作用为基础的用于研究蛋白质相互作用的经典方法。该实验想要做好还是相当不容易的，我们列举了co-ip实验中的4个关键因素，欢迎参考。

一.裂解条件

    细胞裂解采用温和的裂解条件，不能破坏细胞内存在的所有蛋白质-蛋白质相互作用，多采用非离子变性剂（NP40或Triton X-100）.每种细胞的裂解条件是不一样的，通过经验确定。不能用高浓度的变性剂。细胞裂解液中要加各种酶抑制剂，如商品化的cocktail。

二.明确抗体

使用明确的抗体，可以将集中抗体同时使用。

三.使用对照抗体

单克隆抗体：正常小鼠的IgG或另一类单抗；兔多克隆抗体正常兔IgG。

四.结果真实性

①确保共沉淀的蛋白质是由所加入的抗体沉淀得到的，而并非外源非特异蛋白单克隆抗体的使用，有助于避免污染的发生；
②要确保抗体的特异性，即在不表达抗原的细胞溶解物中添加抗体后不会引起共沉淀；
③确定蛋白质间的相互作用是发生在细胞中的，而不是由于细胞的溶解才发生的，这需要进行蛋白质的定位来确定。

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