•PCR亚克隆
•全基因合成
•定点突变
表达载体通用测序引物
在我们的实验中，载体构建完成后需要对质粒进行验证，验证我们的目的基因是否正确连入载体，我们以目的基因的序列设计引物，可以准确的测得目的基因连入载体的情况，但是如果待测序质粒非常多，针对每个目的基因设计引物并合成引物，成本会非常高，因此，我们可以根据载体上的序列设计通用引物，以便于测序所有连入该载体的基因。
本文根据常用质粒的通用原件序列，汇总了各种类型的质粒的通用测序引物序列
| 载体类型 | 引物序列（5’到3’） |
|---|---|
| 哺乳表达载体CMV启动子型 （F-primer） | CGCAAATGGGCGGTAGGCGTG |
| 哺乳表达载体U6启动子型 （F-primer） | GACTATCATATGCTTACCGT |
| 含荧光素酶报告基因 （F-primer） | AGTCAAGTAACAACCGCGA |
| M13 （F-primer） | CAGGAAACAGCTATGAC |
| M13 （R-primer） | CAGGAAACAGCTATGAC |
| MSCV 哺乳动物细胞逆病毒基因表达载体 （F-primer） | CCCTTGAACCTCCTCGTTCGACC |
| pGEX 载体 （F-primer） | GGGCTGGCAAGCCACGTTTGGTG |
| 含SP6启动子的载体 （F-primer） | ATTTAGGTGACACTATAG |
| 含T3启动子的载体 （F-primer） | GCAATTAACCCTCACTAAAGG |
| 含T7启动子的载体 （F-primer） | TAATACGACTCACTATAGGG |
| 含AOX启动子的载体5’AOX1 （F-primer） | GACTGGTTCCAATTGACAAGC |
| 含35S 启动子载体 （F-primer） | CTATCCTTCGCAAGACCCTTC |
| 含果蝇肌动蛋白5C启动子载体 （F-primer） | ACACAAAGCCGCTCCATCAG |
| 含Alpha-factor信号肽载体 （F-primer） | TACTATTGCCAGCATTGCTGC |
| 氨苄抗性基因5’端序列 （R-primer） | ATAATACCGCGCCACATAGC |
| 含AUG1 启动子的毕赤酵母表达载体 （F-primer） | CAATTTACATCTTTATTTATTAACG |
| 含AUG1 启动子的毕赤酵母表达载体 （R-primer） | GAAGAGAAAAACATTAGTTGGC |
| 含BGH 转录终止子 （R-primer） | TAGAAGGCACAGTCGAGG |
| 含兔β-珠蛋白内含子载体 （F-primer） | CTGGTCATCATCCTGCCTTT |
| 含兔β-珠蛋白内含子载体 | TTTGCCCCCTCCATATAACA |
| 兔β-珠蛋白内含子多聚A区域引物 （R-primer） | TTTTGGCAGAGGGAAAAAGA |
| 氯霉素抗性基因的5'端序列 （R-primer） | GCAACTGACTGAAATGCCTC |
| CRE重组酶5'端序列 （R-primer） | GCAAACGGACAGAAGCATTT |
| 含CYC1载体 （R-primer） | GCGTGAATGTAAGCGTGAC |
| DsRed1 3'端序列 （F-primer） | AGCTGGACATCACCTCCCACAACG |
| DsRed1 5'端序列 （R-primer） | GTACTGGAACTGGGGGGACAG |
| 含SV40 polyA terminator载体 （R-primer） | GTGGTTTGTCCAAACTCATC |
| 果蝇热休克启动子 （F-primer） | CTCTGAATACTTTCAACAAGTTAC |
| 哺乳体系含EF-1a启动子载体 （F-primer） | TCAAGCCTCAGACAGTGGTTC |
| EGFP 3'端序列 （F-primer） | CATGGTCCTGCTGGAGTTCGTG |
| EGFP 5'端序列 （R-primer） | CGTCGCCGTCCAGCTCGACCAG |
| 含EXFP质粒 （R-primer） | GTCTTGTAGTTGCCGTCGTC |
| 含F1 origin质粒 （F-primer） | GTGGACTCTTGTTCCAAACTGG |
| 含GAL1启动子载体 （F-primer） | AATATACCTCTATACTTTAACGTC |
| 含GaL 10启动子载体 （F-primer） | GGTGGTAATGCCATGTAATATG |
| Gal4 DNA结合域3'端序列 （F-primer） | GAGTAGTAACAAAGGTCAA |
| Gal4 DNA激活域3'端序列 （F-primer） | AATACCACTACAATGGAT |
| GFP 3'端序列 （F-primer） | GGTCCTTCTTGAGTTTGTAAC |
| GFP 5'端序列 （F-primer） | CCATCTAATTCAACAAGAATTGGGACAAC |
| 含GPD 启动子载体 （F-primer） | CGGTAGGTATTGATTGTAATTCTG |
| Gateway cassette 3'端序列 （F-primer） | GCATGATGACCACCGATATG |
| Gateway cassette 5'端序列 （R-primer） | AATCTCGCCGGATCCTAACT |
| 哺乳体系载体H1启动子型 | TCGCTATGTGTTCTGGGAAA |
| HA标签 （F-primer） | TACCCATACGACGTCCCAGA |
| HA标签 （R-primer） | TCTGGGACGTCGTATGGGTA |
| HAT标签 （F-primer） | GAGGAGCACGCTCATGCCCAC |
| 含hGH终止子载体 （R-primer） | CCAGCTTGGTTCCCAATAGA |
| 含hrGFP载体 （F-primer） | TCCCCGAGTACCACTTCATC |
| 含hUBC启动子 （F-primer） | TGAAGCTCCGGTTTTGAACT |
| IRES 3'端序列 （F-primer） | TGGCTCTCCTCAAGCGTATT |
| IRES 5'端序列 （R-primer） | CCTCACATTGCCAAAAGACG |
| L4440 载体5'端多克隆位点序列 （F-primer） | AGCGAGTCAGTGAGCGAG (Caldwell lab) 5' of MCS in L4440 vector, forward primer |
| LacI 5'端序列 （R-primer） | GGCATACTCTGCGACATCGT |
| LacZ 5'端序列 （R-primer） | GACAGTATCGGCCTCAGGAA |
| LexA DNA结合域3'端序列 （F-primer） | CGTCAGCAGAGCTTCACCATTG (Caldwell lab) |
| 哺乳体系载体CMV启动子型 （F-primer） | AGCTCGTTTAGTGAACCGTCAGATC |
| Luc 3'端序列 （F-primer） | AGTCAAGTAACAACCGCGA |
| Luc 5'端序列 （R-primer） | CCTTATGCAGTTGCTCTCC |
| M13 (-21) （F-primer） | TGTAAAACGACGGCCAGT |
| M13 (-40) | GTTTTCCCAGTCACGAC |
| M13/pUC （F-primer） | CCCAGTCACGACGTTGTAAAACG |
| M13/pUC （R-primer） | AGCGGATAACAATTTCACACAGG |
| MBP 3’端序列 （F-primer） | GATGAAGCCCTGAAAGACGCGCAG (Waugh lab) |
| mCherry 3’端序列 （F-primer） | CCCCGTAATGCAGAAGAAGA |
| mCherry 5’端序列 （R-primer） | TTGGTCACCTTCAGCTTGG |
| 果蝇金属硫蛋白启动子 （F-primer） | CATCTCAGTGCAACTAAA |
| MMLV （F-primer） | ATCAGTTCGCTTCTCGCTTC |
| mPGK启动子 （F-primer） | CATTCTGCACGCTTCAAAAG |
| MSCV （F-primer） | CCCTTGAACCTCCTCGTTCGACC |
| MSCV （R-primer） | CAGCGGGGCTGCTAAAGCGCATGC |
| MT1 （F-primer） | GCTGTCCTCTAAGCGTCACC |
| mU6启动子 （F-primer） | CAGCACAAAAGGAAACTCACC |
| Myc （F-primer） | GCATCAATGCAGAAGCTGATCTCA |
| Neo 3'端序列 （F-primer） | CGTTGGCTACCCGTGATATT |
| Neo 5'端序列 （R-primer） | GCCCAGTCATAGCCGAATAG |
| 含NOS启动子载体 （F-primer） | GCGTTCAAAAGTCGCCTAAG |
| 含Nmt1启动子载体 （F-primer） | GCAATGTGCAGCGAAACTAA |
| 含OpIE2 启动子载体 | CGCAACGATCTGGTAAACAC |
| 含p15A origin载体 （F-primer） | TGAAGTCAGCCCCATACGAT |
| pAd-CMV载体SalI限制酶位点后序列 | GCTAGAGATCTGGTACCGTC |
| pBABE载体多克隆位点3'端的SV40 enhancer引物 （R-primer） | ACCCTAACTGACACACATTCC (Weinberg Lab) SV40 enhancer, 3' of MCS in pBABE vectors, reverse primer |
| pBABE载体多克隆位点5'端Psi packaging signal引物 | CTTTATCCAGCCCTCAC |
| 含大肠杆菌araBAD 启动子载体 （F-primer） | ATGCCATAGCATTTTTATCC |
| 含大肠杆菌araBAD 启动子载体 （R-primer） | GATTTAATCTGTATCAGG |
| pBluescript载体 （F-primer） | TCGAGGTCGACGGTATC |
| pBluescript载体 （F-primer） | TCTAGAACTAGTGGATC |
| pBMN 载体 MMLV序列 | GCTTGGATACACGCCGC |
| pBR322 载体的ori引物 （F-primer） | GGGAAACGCCTGGTATCTTT |
| pBR322载体BamHI位点上游序列 （F-primer） | CTTGGAGCCACTATCGAC |
| pBR322载体EcoRI位点上游序列 （F-primer） | AATAGGCGTATCACGAGGC |
| pBR322载体BamHI位点下游序列 （R-primer） | GGTGATGTCGGCGATATAGG |
| pCAG载体兔β-珠蛋白内含子引物 （F-primer） | GCAACGTGCTGGTTATTGTG |
| pCasper载体果蝇微白基因引物 （R-primer） | GGGTTTTATTAACTTACAT |
| pCasper载体Hsp70启动子引物 （F-primer） | GCAACTACTGAAATCTGCCAAG Drosophila Hsp70 promoter, forward primer |
| pcDL载体EcoRI位点5’端 （F-primer） | GTTGCCTTTACTTCTAGGCCT |
| pENTR载体的attL1 5’端 （F-primer） | CTACAAACTCTTCCTGTTAGTTAG |
| pENTR载体的attL2 3’端 （R-primer） | ATGGCTCATAACACCCCTTG |
| pGEX 载体多克隆位点的3'端序列 （R-primer） | CCGGGAGCTGCATGTGTCAGAGG |
| pGEX 载体glutathione-S-transferase 3’端序列 （F-primer） | GGGCTGGCAAGCCACGTTTGGTG |
| pGP704载体R6K gamma origin引物 （R-primer） | AACAAGCCAGGGATGTAACG |
| pHybLex 载体ADH terminator引物 （R-primer） | GAGTCACTTTAAAATTTGTATACAC |
| pL启动子载体 （F-primer） | ACTGAGCACATCAGCAGGAC |
| pLXSN 载体 （F-primer） | CCCTTGAACCTCCTCGTTCGACC |
| pMT2载体 （F-primer） | TTGCCTTTCTCTCCACAGGT |
| pMX-S1811载体的MMLV序列 （F-primer） | GACGGCATCGCAGCTTGGATACAC |
| 含Polyhedrin 启动子载体 （F-primer） | AAATGATAACCATCTCGC |
| 含Polyhedrin 启动子载体 （R-primer） | GTCCAAGTTTCCCTG |
| pQE 载体 （F-primer） | CCCGAAAAGTGCCACCTG |
| pREP 载体 （F-primer） | GCTCGATACAATAAACGCC |
| pRS载体的酵母选择标记序列 | CGGCATCAGAGCAGATTGTA |
| PZ P-element （R-primer） | CTTAGCATGTCCGTGGGGTTTGAAT |
| pTrcHis 载体 （F-primer） | GAGGTATATATTAATGTATCG |
| pTrcHis 载体 （R-primer） | GATTTAATCTGTATCAGG |
| 嘌呤霉素3’端基因序列 （F-primer） | GCAACCTCCCCTTCTACGAGC |
| pZIP载体 （R-primer） | TCCTTTCCAGCGAGGTTCTA |
| RSV基因3’端序列 （F-primer） | ACATGGGTGGTGGTATAGCGCTTGCG |
| 海肾荧光素酶基因3’端序列 （F-primer） | CCAGGATTCTTTTCCAATGC |
| pGL3 载体 （F-primer） | CTAGCAAAATAGGCTGTCCC |
| SP6启动子载体 （F-primer） | ATTTAGGTGACACTATAG |
| SV40 polyA引物 （R-primer） | GAAATTTGTGATGCTATTGC |
| SV40启动子载体 （F-primer） | TATTTATGCAGAGGCCGAGG |
| SV40-splice序列 （R-primer） | CACAAAGATCCGGACCAAAG |
| T7 终止子引物 （R-primer） | GCTAGTTATTGCTCAGCGG |
| Tac 启动子载体 | GAGCGGATAACAATTTCACACAGG |
| tdTomato 3’端序列 （F-primer） | CTGTTCCTGTACGGCATGG |
| tdTomato 5’端序列 （R-primer） | TCTTTGATGACGGCCATGT |
| 四环素抗性基因5’端序列 （R-primer） | GGCGAGTTTACGGGTTGTTA |
| Thymidine kinase polyA引物 （R-primer） | TTGTCTCCTTCCGTGTTTCA |
| Tn7转座子引物 | GGGGTGGAAATGGAGTTTTT |
| 哺乳体系载体含U6启动子型 （F-primer） | CAAGGCTGTTAGAGAGATAATTGGA |
| Ubx基因引物 （F-primer） | AACTCGTACTTTGAACAGGC |
| V5 表位基因引物 （R-primer） | ACCGAGGAGAGGGTTAGGGAT |
| WPRE 5’端引物 （R-primer） | CATAGCGTAAAAGGAGCAACA |
| XBG 3'UTR （R-primer） | GACTCCATTCGGGTGTTC |
| XEF1a增强子/启动子引物 （F-primer） | TTTCGCCCTAACTTCGTGAT |
