琼脂糖凝胶回收DNA实验流程

制胶

1.称量0.4g琼脂糖倒入烧瓶中；
2.加入50ml TAE缓冲液；
3.在微波炉中融化1分钟，然后在冷水中冷却或加入50毫升冷TAE；
4.加入1.5微升溴化乙锭（记得把枪头放入专门的废物桶中）；
5.轻微摇晃混合胶液，倒入制胶板中；
6.插上合适孔数的制胶梳。

跑胶

1.将1/10体积的DNA上样缓冲液加入样品中；
2.从制胶板中取下凝胶并放入电泳槽中；
3.添加足够的缓冲液以覆盖凝胶；
4.将DNA样品点入胶孔中；
5.加适当的DNA Marker；
6.盖上电泳槽盖；
7.将电压调整到110V，然后按“running man”开始通电；
8.当染料带跑到凝胶的2/3处时停止跑胶。

从凝胶中回收DNA

1.在高功率UV盒上看胶，拍照；
2.将凝胶移至低功率UV盒（确保凝胶盒清洁，并佩戴UV防护罩）；
3.切出目的条带，将其切块，然后将其移至eppendorf管中；
4.称量eppendorf管中的凝胶碎片（称量前用空管度归零），记录凝胶的重量；
5.向管中加入等体积的结合缓冲液（如果凝胶重100mg，加100ul）；
6.在55度下融化约5分钟，或直再看不到固体凝胶碎片；
7.加入等体积的异丙醇（100μl）并充分混合；
8.将管内容物转移至紫色柱，并以14000rpm离心30秒；
9.弃液体；
10.加入500ul PB缓冲液，以14000rpm离心30秒，弃液体；
11.加入750ul洗涤缓冲液，以14000rpm离心30秒，弃液体；
12.以14000rpm离心空柱1分钟；
13.将干燥柱移至没有盖子的新eppendorf管中；
14.加入30ul EB缓冲液并以14000rpm离心1分钟；
15.将洗脱的DNA移至新的eppendorf管中并测试纳米滴上的浓度。

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