如何选择抗体制备技术

　　 长期以来，杂交瘤技术都是实验室制备单克隆抗体的主要技术。但是在近10年里，基因工程重组技术的蓬勃发展带来了新的革新，尤其在高端抗体应用领域，包括治疗性抗体药物的开发等。
　　噬菌体展示等技术的操作难度更高 ，假如您的实验对象是一些高毒性和无免疫性抗原，比如一些肿瘤和病毒自身的抗原，那么选择抗体重组技 术是很好的选择。
　　 如果你的实验需要利用到抗体，无论是否将重组技术带进实验室或者利用它们来制备抗体，下面这些都值得您考量一下。

杂交瘤技术

　　杂交瘤技术起源于上个世纪70年代中期，操作简单易懂，许多研究机构也建立杂交瘤核心的实验室来一次性处理多组样品。选择正确的技术取决于你所需的抗体的用途。假如你需要的高产量的抗体，杂交瘤技术是正确的选择。但是它的问题在于漫长的周期和不完全的抗原表位的识别。

优点：

• 流程简单
• 产量高
• 特异性高

缺点：

• 周期长
• 不完全的抗原表位识别
• 不是所有的抗原都可以解决
• 不能制备无免疫性和高毒性的抗原的抗体
• 功能筛选只能在克隆筛选和培养之后
• 抗体需要人源化

重组抗体技术

　　实验室需要结构性抗体的特性或者高度的目标靶向亲和力，尤其是在药物研发中，起初都需要使用重组抗体技术。还是那句话，是否使用重组抗体技术取决于抗体的用途。如果你想研究抗原的每一个抗原表位的话，这种技术是不错的选择。

优点：

• 周期短
• 可以解决困难的抗原
• 抗原表位多样性较多
• 功能筛选可以与抗体确定同步
• 可以增加抗体的亲和力
• 减少实验动物的使用

缺点：

• 技术要求高
• 产量少
• 许可性的抗体和蛋白成本较高
• 存在非特异结合的结果

从分离到表达

　　不同的抗体重组技术可以用于制备不同的抗体，由此衍生出很多的相关技术，噬菌体展示就是其中最出名的。昆虫和哺乳动物细胞的表达系统从理论上而言是相似的，但是其它的分子进化类型需要重新提炼和分离抗体。
　　剑桥抗体技术和其它研究单位的大规模抗体库的筛选通常都是一些方法组合，例如噬菌体展示和核糖体展示组合，进一步提高抗体的亲和力。
　　然而，较少的抗体库能通过商业途径获得，目前对于知识产权的保护限制了该技术的发展。

噬菌体展示

　　噬菌体展示技术就是将天然免疫和获得性免疫个体中分离的抗体基因插进噬菌体DNA中。抗体分子包括抗体的可变区域，该区域能与抗原结合，称作scFv，被连接到噬菌体衣壳蛋白上。噬菌体感染大肠杆菌后，单链DNA在宿主内复制，并且噬菌体重新组装，分泌到培养基中去，同时不会裂解宿主大肠杆菌。噬菌体与靶标抗原孵育，结合上去的噬菌体分离后，扩增，纯化。这种方法能方便的筛选大量的克隆。

核糖体展示

　　该技术是基于一种稳定的抗体-核糖体-mRNA复合物的构象基础上的。因此与噬菌体展示技术较为相似。抗体蛋白与它的编码序列物理连接。抗体基因转录，产生许多mRNA分子，每一个代表着不同抗体基因。mRNA分子与细菌的核糖体孵育，然后mRNA翻译成蛋白质，但mRNA分子的3’端仍然未成熟，每个复合体展示一种不同的抗体，当经过一个含有靶标抗原的亲和柱子后，一些能结合上去的复合体不会被洗去，该展示技术完全在体外完成，并且不需要克隆就能完成大规模抗体库的构建。

酵母展示

　　酵母展示是利用一个配对因子蛋白Aga2p在酿酒酵母来展示scFv，利用生物素标记抗原来分离想要的细胞。更进一步，可以利用荧光标记抗原，流式细胞仪来追踪实时的结合情况。
　　该技术能针对多种抗原表位产生抗体，但需要对酵母的遗传背景较为熟悉和流式细胞仪技术。与噬菌体展示技术相比，转化效率较低，需要大量的DNA来构建抗体库。

杆状病毒展示

　　杆状病毒是目前最常见的昆虫细胞表达系统。抗体基因被插入多角体启动子的下游，使得能高水平分泌到库从细胞培养物中去。
　　该技术的不足是需要细心的培养，昆虫细胞需要大量的氧气。此外，时间是该技术的关键因素。稳定的转染有几种形式，包括抗生素和启动子的转染，利用杆状病毒展示技术可以避免噬菌体展示技术中遇到的一些蛋白折叠的问题。

哺乳细胞展示

　　在哺乳动物细胞中表达蛋白的优势是哺乳动物系统能即时的识别抗体。人类293细胞系和中国仓鼠细胞系是常用的哺乳动物细胞抗体表达系统，然而该技术需要使用大量的基因工程技术，并且哺乳动物细胞的生长需要耗费大量的时间，同时产量低也是个大问题。

 

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