scFV介绍

　　单链抗体作为一种小分子基因工程抗体，以其分子量小、穿透性强、亲和力高等优势在理论和应用方面的研究引起了广泛的关注，其在显像定位诊断、靶向治疗和参与细胞免疫等方面展示出了可观的应用前景。

一、scFV结构特点

　　scFV 是将抗体的重链可变区和轻链可变区通过 15～25 个氨基酸的短肽首尾连接而成的重组蛋白，是亲代抗体全部抗原结合特异性的最小功能结构单位。 与传统抗体相比,scFV 存在如下几方面的优势： ① 分子质量小；② 较好地保留了原抗体的结合位点构型、位置及其对抗原的亲和活力和准确度；③ 有很好的穿透性，易透过血管壁与靶细胞进行接触、接合，适用于肿瘤的诊断和治疗；④ 易于进行分子改造，可直接杀伤靶细胞；⑤ 可由适当的大肠杆菌进行大批量生产；⑥ 可绕过常规抗体制备程序，获得常规方法难以实现的人源性抗体和毒素类抗体。当然，scFV也存在一些缺点，如分子量小，免疫系统对抗体的清除速度快，难以达到诊断或治疗所需的时间；结构简单,亲和力低,稳定性差等

二、scFV 的制备技术

2.1 噬菌体展示技术

　　近年来，噬菌体成为展示scFV 的重要平台。噬菌体展示技术是借助基因工程，使scFV片段与噬菌体外壳蛋白编码基因相融合，从而将 scFV 表达于噬菌体表面，便于进一步的鉴定与筛选。

2.2 核糖体展示技术

　　核糖体展示技术具有诸多优点，如亲和力高、展示速度快、简便易行、不受细菌转化效率的影响等，从而缩短了实验周期。核糖体展示技术是一种高效的体外筛选 scFV 的方法，主要过程是使新生scFV与其mRNA 连接形成复合物,富集与抗原具有高亲和性的 mRNA ，再通过 PCR 反转录得到扩增产物。但在此过程中若未对 DNA 聚合酶进行功能校对，则较容易发生基因突变。

2.3 酵母表面展示技术

　　酵母表面展示是筛选具有高特异性和亲和力scFV的有力方法,但由于酵母转化效率低，使得实验周期变长，因此限制了筛选抗体的种类和产量。酵母表面展示技术的核心是将重组蛋白连接到酵母的细胞壁上。 例如，蛋白质可以通过与α- 凝集素黏附受体融合展示在酵母菌细胞壁上。该技术充分利用了酵母细胞的内质网,使得重组蛋白在内质网中能够准确折叠。

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