噬菌体展示肽库筛选是将随机肽段插入到噬菌体衣壳蛋白上形成融合蛋白而展示,通过目标受体来筛选与其相互作用的噬菌体肽,经过洗脱、扩增,富集到的特异性若干重组噬菌体 。钟鼎生物目前可以提供两大类的多肽文库筛选服务。
一、Ph.D.展示系统
基于一个简单的M13噬菌体载体,修饰为五价肽作为N端展示与次要外壳蛋白pIII融合。这种蛋白通过与受体细菌细胞的F -菌毛结合来调节噬菌体的感染性,在成熟的M13病毒粒子的一端聚集了5个拷贝。如果显示的肽足够短(< 50个残基),pIII的感染功能不受影响,5个拷贝均可携带显示肽。
线性十二肽:NEB,Ph.D-12
环七肽:NEB,Ph.D-C7C
二、噬菌粒展示系统(Phagemid System)
噬菌粒是一种质粒,基因组小,易于操作,且转化效率较高。噬菌粒展示系统利用辅助噬菌体提供包装用的野生型pⅢ或pⅧ,这样大大减弱了由pⅢ或pⅧ―多肽融合蛋白表达带来的负面影响,从而允许插入的片段较大(可多至50 000),更适合制备大片段的肽库。另外,在噬菌粒表面的外源肽是单价展示,可以用来筛选高亲和力的结合肽。
利用合成的核苷酸单链为引物,采用pCantab 5E噬菌粒,经过双Sfi I和Not I进行酶切,将酶切后的片段和载体进行连接构成重组质粒,并将重组后的质粒以电转化的方式转入到TG1大肠杆菌感受态细胞,完成噬菌体环八肽、环九肽、环十肽文库的构建。
环八肽、环九肽、环十肽:钟鼎制备,以CX····XC为骨架,随机多肽两端的半胱氨酸残基可以被氧化形成一个二硫键从而形成环状结构,以该随机多肽作为外源序列,插入到pCantab 5E质粒中形成重组质粒。
服务优势
噬菌体肽库筛选原理
噬菌体肽库的筛选原理是建立在“生物淘选”的体外筛选方法上。最简单的淘选方法是:抗原包被,固定在平板或小珠上,将展示不同多肽的噬菌体库与靶分子孵育,先洗去未结合的噬菌体,而后洗脱特异性结合的噬菌体,在大肠杆菌中扩增洗脱下的噬菌体。重复上述结合/扩增过程,使与靶分子结合的多肽序列的噬菌体得到富集。经过 3-4轮筛选后,每个克隆通过 DNA 测序或 ELISA 鉴定克隆。
服务详情
服务内容 | 文库类型 | 筛选量 | 周期 |
Ph.D.展示系统 | Ph.D-12 | 94*5克隆 | 6-8周 |
Ph.D-C7C | 94*5克隆 | ||
Ph.D.展示系统混合文库 | 94*10克隆 | ||
噬菌粒展示系统(Phagemid System) | 环八肽 | 94*5克隆 | |
环九肽 | 94*5克隆 | ||
环十肽 | 94*5克隆 | ||
噬菌粒展示系统混合文库 | 94*15克隆 | ||
Ph.D.展示系统和噬菌粒展示系统 | Ph.D.展示系统混合文库和噬菌粒展示系统混合文库 | 94*25克隆 |
筛库案例
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