纳米抗体制备服务说明
钟鼎生物的技术总监是国内早期研究单域抗体的科学家之一,拥有十余年纳米抗体制备经验。随着抗体药物研究方兴为艾,研究机构和医药企业需求日益增多,公司斥巨资打造羊驼单域抗体研究中心,集结了以博士为主为核心,硕士为主的技术团队,为广大科研工作者生产优质的抗体。
抗原的要求
1、抗原纯度
高纯度的抗原在产生免疫应答与筛选过程至关重要,因此建议客户抗原纯度在95%以上。我们在收到客户抗原后,会通过SDS-PAGE检测抗原纯度。
2、抗原量
根据不同抗原,需要客户提供不同量的抗原,请提前与技术人员沟通。同时客户不得隐瞒抗原是否具有致病、致死危险。
3、抗原浓度
抗原浓度保证在2mg/mL,且不含叠氮钠。
免疫方案
我们为客户提供标准的四次免疫服务方案如下,客户也可自己提供免疫方案和佐剂。
羊驼免疫方案提示 | |
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周期 | 项目 |
1周内 | 免疫前采血5mL,作为阴性血清;完全弗氏佐剂与抗原(1 mg)1:1混合,乳化后内、皮下多点注射 |
3周 | 抗原(0.5 mg)与不完全弗氏佐剂1:1混合,乳化后皮下多点注射 |
4周 | 采集5mL 外周血,监测免疫反应 |
6周 | 抗原与不完全弗氏佐剂(0.5 mg)1:1混合,乳化后皮下多点注射 |
7周 | 采集50mL 外周血,用于纳米抗体库构建 |
9周 | 抗原与不完全弗氏佐剂(0.5mg)1:1混合,乳化后皮下多点注射(按血清反应确定是否再免疫) |
10周 | 采集50mL 外周血,用于纳米抗体库构建 |
构建噬菌体抗体库
1、第四次免疫结束后,从静脉抽取50mL全血,用于分离外周血淋巴细胞;
2、抗体库质量:
· 插入率﹥95%,随机挑取48个克隆测序,没有重复序列
· 抗体库容量达到107~108次方
3.向客户提供质检报告与抗体库
抗体库筛选
1、根据项目实际情况,选择不同的筛选方案,如竞争筛选,固相筛选,液相筛选,负筛选等筛选方法。
2、免疫抗体库,每轮筛选后挑取24个克隆进行鉴定。
3、向客户提供5个以上的特异性克隆。
纳米抗体表达纯化
1、将纳米抗体基因克隆至真核或原核表达载体。
2、向客户提供高纯度纳米抗体。
亲和力测定
采用Biacore测定抗体的亲和力
注意: 不是所有的抗原都能使动物产生免疫应答,根据我们的经验,如果经过3~4次免疫后检测血清效价(OD450≈1.0)小于5000,我们建议客户终止项目,不再进行抗体库的构建与筛选。
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