在ELISA检测中，你是否还在为检测目标物含量过低而苦恼，是否还在为所使用抗体、试剂盒灵敏度过低而迷茫。其实早在1992年，科学家针对这些问题，已经对ELISA方法做出了改进。他们结合了 ELISA 的特异性和 PCR 的信号放大功能，在抗体上偶联了核苷酸，这种偶联物可以充当免疫反应和 DNA 扩增之间的桥梁，使ELISA法灵敏度放大1000倍。后来这种方法被称为免疫PCR（Immuno-PCR，iPCR）。
夹心免疫 PCR是最常见的 iPCR形式，将捕获抗体固定在微量滴定板表面，用于结合目标分析物。随后，捕获抗体与寡核苷酸偶联的二抗结合。通过实时 PCR 扩增并检测 DNA。
免疫PCR测定的主要步骤
（1）将特异于蛋白质靶标的抗体固定到容器表面（2）洗涤以去除未结合的抗体（3）添加样品（4）洗涤以去除未结合的样品
（5）添加与DNA分子偶联的第二特异性抗体（6）洗涤去除未结合的抗体（7）DNA扩增和检测
免疫PCR的方法学特点
尽管拥有如此多的优势，但免疫 PCR 仍未取代 ELISA 成为诊断行业的首选检测形式。其主要原因在于，抗体与寡核苷酸的偶联有一定的难度，比如成本较高、耗时较长、需要具备专业知识。
案例分享
应用免疫PCR测定阿尔茨海默症生物标志物P217时，线性范围在1fg/mL-10pg/mL，R^2大于0.99，相对于ELISA方法，灵敏度提高了1000倍以上。
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