本产品是用于伏马菌素定量分析的酶联免疫(ELISA)试剂盒.
试剂盒包含96孔或48孔测试所需的材料，包括标准品，需要实验室配备酶标仪.

检测范围:谷物

样品前处理:研磨, 甲醇水提取, 过滤, 稀释

检测时间: 20分钟 (不包括样品前处理时间).

检出限   谷物和饲料: 0.75 ppm

特异性
组分	交叉反应率 %
Fumonisin B1 Fumonisin B2 Fumonisin B3	100 124±11 100±10

1.检测原理

该测定在已用抗伏马菌素抗体包被的微孔中进行。 在预混孔中，将酶标记的伏马菌素和标准溶液或样品混合，然后转移到包被有抗伏马菌素抗体的微孔板中。在孵育过程中，游离的伏马菌素和酶标记的伏马菌素 竞争固相上的抗伏马菌素抗体结合位点。然后在洗涤步骤中除去任何未结合的酶耦合物和伏马菌素分子。通过添加固定量的底物，将无色的色原体转化为蓝色 产物。添加终止试剂会导致颜色从蓝色变为黄色。用酶标仪在450nm处测量吸光度。溶液颜色的深浅与标准品/样品中的伏马菌素浓度成反比。

2.提供的试剂

提供的试剂
预混合孔板：未经包被的空白孔。	终止液: 1瓶，白色盖子。
伏马菌素B1标准品：5瓶，浓度分别为：0ppm, 0.75ppm, 4ppm, 20ppm, 60 ppm.	酶耦合物：1瓶。
洗涤缓冲液10x: 1 瓶, 50ml。	发展液: 1瓶。
洗涤缓冲液10x: 1 瓶, 50ml。	发展液: 1瓶。
微孔板：包被有抗伏马菌素抗体,装于带有干燥剂的铝箔袋中。（微孔板可独立拆分，单独使用。）

3.未提供的试剂及设备

未提供的试剂及设备
霉菌毒素提取液 A或 70% 甲醇	甲醇
NaCl	去离子水或蒸馏水。
天平	粉碎机或研磨机 (例如 “Osterizer”)
振荡器（可选）	滤纸 (Whatman 1)
20~200 ul 可调微量移液器	50~300 ul 多通道可调微量移液器 (可选)
吸水纸	酶标仪（450nm）

4.使用者注意事项

① 该产品仅供体外诊断使用。
②部分试剂含有防腐剂。终止液含有硫酸并且有刺激性； 标准品中包含甲醇而易燃，小心处理试剂，避免接触皮肤、眼睛和黏膜。

5.处理和存储说明

①将试剂盒存储在 2 ~ 8℃，不能冷冻. ②将未使用的微孔板放回到装有干燥剂的铝箔袋中. ③不要使用过期的产品. ④不要混合不同试剂盒内的试剂. ⑤严格按照试剂盒内附带的说明书进行操作.

6.样品处理

①充分混匀待测样品.
②细细粉碎样品.
③称取粉碎后的样品，选择下表中描述的任一选项.

样品量	NaCl	提取溶液
50 g	10 g	250 ml 70% 甲醇
5 g	1 g	25 ml 70% 甲醇
50 g	/	250 ml 70% 甲醇, 4% NaCl
5 g	/	25ml 70% 甲醇, 4% NaCl

7.分析过程

7.1.实验前准备工作

（1）使用前将所有试剂置于室温，并在室温下保持至少1小时.
（2）使用后立即将剩余试剂放于 2 ~ 8 ℃ 环境中.
（3）不要更改实验步骤，特别是：
①不要延长第一步的孵育时间；
②不要在高于25℃和低于18℃的环境中孵育微孔板；
③孵育期间不要摇动微孔板；
④使用精确的微量移液器和配套枪头.
(4)一旦开始实验，应不间断的完成所有实验步骤.
(5)ELISA结果的可重复性在很大程度上取决于洗涤微孔板的效率和均匀性；始终遵循说明书中的所述程 序；
(6)每个标准品和样品使用新的一次性吸头，以避免交叉污染.
(7)不要让吸头接触微孔中已有的液体.
(8)在所有孵育期间避免阳光直射。不能使用密封胶带覆盖微量滴定板.

7.2.分析步骤

(1)预先安排好实验流程，记录好每个标准品/样品的位置，如果条件允许，建议做平行实验。把未使用的微孔条放回到装有干燥剂的铝箔袋中。同时准备相同数量的空白预混合孔。注意：建议在每次测定中不超过48孔（包括标准品）；如果不使用多道移液器，则建议在每次测定不超过16孔（包括标准品）.

(2)添加 100 µl 酶耦合物到每个预混合孔中.

(3)添加 50 µl 标准品/样品到相应的预混合孔中.
①使用微量移液枪，混合每个预混合孔的内容物（移液器上下三次），立即将100 µl转移到相应的抗伏马菌素抗体包被的微孔中。
②注意：每次使用新的加样头，防止交叉污染.

(4)室温孵育 10 分钟；
不要延长第一步的孵育时间，在孵育过程中不要摇动微孔板 .

(5)洗板
①孵育结束后倒掉孔中的液体.
②用稀释后的洗涤缓冲液填满微孔，倒掉微孔中的液体. 重复清洗步骤三次.
③将微孔板倒扣在吸水纸上并轻轻敲打，清除残留的液滴.
不要让微孔变干.

(6)发展：添加 100 µl 发展液到每个微孔中，彻底混合几秒钟.

(7)室温孵育 10 分钟.

(8)添加50 µl 终止液到每个微孔中，并彻底混合几秒钟.

(9)在 450 nm处测定吸光度值，在15分钟内读数.

8.结果计算

将每个标准品和样品的吸光度值除以标准0（B0）的吸光度并乘以100；因此，最大结合（B0）等于100％，吸光度值以百分比表示

①根据每个标准品的B/B0值和伏马菌素标准品浓度绘制标准曲线.
②将每个样品的B/B0值插入校准曲线中得到相应浓度.

9.标准曲线绘制

10.结果评估

在结果出具之后，有必要验证测定性能。通过将获得的数据与试剂盒中给出的数据进行比较来执行验证。 如果值超出给定的数据，建议检查试剂盒的失效日期，吸光度记录的波长以及所用的程序。 如果没有出现操作错误，请联系我们的技术支持.

11.试剂盒参数

11.1.分析参数

Bo 吸光度值	≥ 0.7 OD450nm
B/Bo 50%	2.3 - 5.6 ppm

11.2.分析性能

LOQ

玉米：1 ppm

12.责任

使用试剂盒评估为阳性的样品必须使用确认方法重新测试。钟鼎生物对由于不正确使用该试剂盒而导致的任何客户损失以及因结果而采取的任何行动不承担任何责任。

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