ELISA实验FAQ

1、如何提高ELISA检测实验的稳定性？

(1)首先，确保原料一致性，不得随意更换原材料；
(2)其次，包被原需要加入包被稳定剂，有助于保证包被条件一致；
(3)最后，所有ELISA检测实验参数不得改变

2、如何排除ELISA检测非特异性反应？

(1)首先，确定抗原抗体的来源及特异性；
(2)其次，抗体与其他无关抗原蛋白的反应性；
(3)最后，实验操作规范性，阴性对照很重要。

3、ELISA中显色淡，灵敏度低是什么情况？

（1）试剂盒运输时间过长，且气温过高造成酶的活性降低：
试剂盒运输过程加足量冰袋并尽可能缩短运输时间。
（2）加样量不足，移液时抽吸排放过快，有气泡、或吸头内残留液体过多：
经常校正移液器，注意吸头要与移液器吻合。移液不宜过快，排放要完全。
(3)显色剂加量不足，或加入顺序颠倒:
按照说明书要求，先加入A液，后加入B液，并保证加入量。
(4)样品用NaN3防腐，影响了酶的活性:
不可以使用NaN3防腐。
（5）恒温箱温度达不到37℃
①经常注意水箱中合适的水位
②在保证水不没过酶标板的前提下，使水位尽量高，以保证反应温度。
③注意控制恒温箱温度，尽可能让其稳定在37℃左右，尽量避免频繁开关恒温箱门。

4、实验出现假阳性多，本底高甚至花板该怎么办？

(1)污染：
注意更换吸头，尽可能避免污染,对先加样后加酶的操作，加酶时要注意吸头不要接触标本，造成污染，当可能造成污染时，一定要更换吸头，切记侥幸心理。
(2)整个操作时间过长、造成反应时间不同（第一孔与最后一孔反应时间相差很悬殊）。气温高时更明显:
加快操作速度，尽量不要堆积多块板子操作
(3)手工洗板方式不正确:
洗板时，垂直加入洗液，保证一定的冲击力；洗液要注满板孔，并保证30-60秒的浸泡时间。
(4) 显色完成后没有终止反应:
显色完立即终止反应。

5、出现白板的原因以及应对措施？

(1)一般来说，要么忘记加酶，要么忘记加显色液：严格按照说明书操作
(2)酶或A、B液被污染失效:防止组分被污染，注意保存
(3)把终止液当A液：注意液体组分加样顺序。

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