FITC标记抗体

  ◎当前位置:首页>>技术服务>>抗体相关技术服务>>抗体标记服务>>FITC标记抗体

    FITC(异硫氰酸荧光素)标记抗体是将FITC与特异性抗体经适当方法连接而成,FITC(异硫氰酸荧光素)能与各种抗体蛋白结合,结合后的抗体不丧失与一定抗原结合的特异性,其应用范围非常广泛,结果即时可见、敏感性高。下文将会介绍FITC标记抗体的实验流程。

FITC荧光素

1.FITC标记抗体所需的材料

材料
1-2mg/ml的纯化单克隆抗体 FITC标记缓冲液。4℃
透析液,4℃ 5mg/ml FITC溶解于无水DMSO,使用前配制
Sephadex G-25

2.FITC标记抗体实验流程

(1)用500ml FITC标记缓冲液在4℃透析纯化的单抗,共2d。期间更换2或3次缓冲液(通常情况下,5ml的1-2mg/ml的抗体可以用500ml缓冲液)。在A280处检测吸光度,确定抗体浓度(=A280×0.74×稀释倍数)。

(2)每毫克抗体加入20微升的5mg/ml FITC。室温孵育2h。

(3)用透析液透析去除未结合的FITC,共2d。期间更换2或3次缓冲液。或者过Sephadex G-25去除。

(4)用透析液稀释FITC-lgG复合物,使A280<2.0。在A280和A492处检测吸光度,计算蛋白质浓度。
蛋白质(mg/ml)=A280-(A492×0.35)/1.4(FITC标记抗体摩尔系数的倒数)

(5)计算蛋白质的摩尔数:

蛋白质(mol)=蛋白质(mg/ml)/1.5×105
FITC(mol)=A492/0.69×105
1.5×105=mol•wt•Ig
0.69×105=mol•wt•FITC

6.计算荧光素/蛋白质比(F/P):

F/P=FITC摩尔数/蛋白质摩尔数;

您可能对以下内容感兴趣:
    抗体标记物的选择    HRP标记抗体    抗体标记服务