FITC（异硫氰酸荧光素）标记抗体是将FITC与特异性抗体经适当方法连接而成，FITC（异硫氰酸荧光素）能与各种抗体蛋白结合，结合后的抗体不丧失与一定抗原结合的特异性，其应用范围非常广泛，结果即时可见、敏感性高。下文将会介绍FITC标记抗体的实验流程。

1.FITC标记抗体所需的材料

材料
1-2mg/ml的纯化单克隆抗体	FITC标记缓冲液。4℃
透析液，4℃	5mg/ml FITC溶解于无水DMSO，使用前配制
Sephadex G-25

2.FITC标记抗体实验流程

（1）用500ml FITC标记缓冲液在4℃透析纯化的单抗，共2d。期间更换2或3次缓冲液（通常情况下，5ml的1-2mg/ml的抗体可以用500ml缓冲液）。在A₂₈₀处检测吸光度，确定抗体浓度（=A₂₈₀×0.74×稀释倍数）。

（2）每毫克抗体加入20微升的5mg/ml FITC。室温孵育2h。

（3）用透析液透析去除未结合的FITC，共2d。期间更换2或3次缓冲液。或者过Sephadex G-25去除。

（4）用透析液稀释FITC-lgG复合物，使A280＜2.0。在A₂₈₀和A₄₉₂处检测吸光度，计算蛋白质浓度。
蛋白质（mg/ml）=A₂₈₀-（A₄₉₂×0.35）/1.4（FITC标记抗体摩尔系数的倒数）

（5）计算蛋白质的摩尔数：

蛋白质（mol）=蛋白质（mg/ml）/1.5×10⁵
FITC（mol）=A₄₉₂/0.69×10⁵
1.5×10⁵=mol•wt•Ig
0.69×10⁵=mol•wt•FITC

6.计算荧光素/蛋白质比（F/P）：

F/P=FITC摩尔数/蛋白质摩尔数；

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