重组抗体表达服务常见问题解析

1.如何提高抗体的稳定性？

优化洗脱条件，可以从高的PH逐渐降低；纯化的样品要及时中和，甚至一边纯化一边中和；纯化实验过程中样品低温制备和保存；添加蛋白保护剂比如甘油、吐温；抗体浓度较高时需要及时稀释，避免高浓度聚沉的风险。

2.如果用哺乳体系进行表达的话，选择293或cho有什么区别？

CHO细胞即中国仓鼠卵巢细胞，是目前表达外源蛋白最多最成功的细胞之一。该细胞属于成纤维细胞，是一种非分泌型细胞，自身很少分泌内源蛋白，因此有利于目的蛋白的纯化分离；相较于其他细胞类型，CHO细胞是治疗性蛋白生产的主要宿主细胞的原因如下：
（1）能在化学成分限定和无血清悬浮培养中稳定生长，
（2）该细胞基因组信息明确，在人类致病病毒应答方面表现出合理的安全性，
（3）能够表达与人相似的翻译后修饰。
此外，CHO细胞表达系统的最重要优势之一是能够容易的得到基因改造的细胞。然而，因为糖基化模式与人类不完全相同，导致CHO细胞产生的重组蛋白在某些时候仍然表现出免疫原性。
HEK293细胞是真核蛋白表达常用的细胞之一，它具有以下优势： 更快的生长速度，更高的生长密度、转染效率高，表达后修饰更接近人体蛋白的结构，可能会有潜在的人病毒污染。

3.钟鼎表达重组抗体服务的优势是什么？

可变区和高变区：
(1)基于生物信息学的氨基酸序列分析，
(2)基于结构生物学的同源建模以及计算机辅助设计和抗体改造
(3)基于空间结构的序列分析的重要氨基酸的回复突变
恒定区：
重链、轻链载体骨架，人源、鼠源多物种可供选择。
丰富的载体表达哺乳动物抗体恒定区。

4.重组抗体的载体如何选择？

重组抗体表达载体和细胞最好是配套的，比如293T细胞对应PCDNA3.1载体，有EBNA改造的细胞对应有Orip复制起点的载体，还有就标准细胞株和标准质粒，例如Thermo的293F对应PCDNA3.4载体等。

5.如何提高重组抗体的产量？

选择高表达系统，制备无内毒素、高超螺旋质粒，细胞状态要好，时间允许可以表达优化，延长表达时间，提高纯化得率。

6.表达的重组抗体是否具有活性？

真核表达系统较原核表达的优势就是活性较好，理论上大部分都是有活性的，但是不同的样品稳定性不一样，需要以实际实验结果为准。

7.是否能高通量筛选重组抗体？

可以做高通量抗体表达及筛选，利用深孔板震荡仪培养，一次可以做大量的表达，可以通过ELISA效价检测筛选，可以通过微量纯化获得20-50ug抗体。

相关服务